大鼠自身免疫性心肌炎Toll样受体9的表达及慢病毒介导Fg12基因沉默干预作用的研究

发布时间：2017-08-30 02:37

  本文关键词：大鼠自身免疫性心肌炎Toll样受体9的表达及慢病毒介导Fg12基因沉默干预作用的研究

  更多相关文章： 自身免疫性实验性心肌炎 Toll样受体9 Fgl2

【摘要】：目的:本实验目的在于建立自身免疫大鼠心肌炎模型以及Fgl2慢病毒介导基因沉默干预的大鼠模型。探讨toll样受体9(TLR9)在自身免疫性大鼠心肌炎中的表达情况,以及以慢病毒介导的人纤维介素2(Fgl2)作为治疗靶点,进一步明确对自身免疫性大鼠心肌炎治疗的可行性及其相关机制。方法:Fgl2RNAi慢病毒的包装及制备。选择购买6周左右Lewis雄性大鼠32只,其中选择正常大鼠8只(NC组),其余剩下的大鼠在第1天以及第8天分别注射猪心肌球蛋白,从而建立实验性自身免疫性心肌炎的大鼠模型,建模成功以后随机地分为3组:心肌炎组(EAM组)、GFP空载体干扰组(GFP组)和Fgl2慢病毒干扰组(RNAi组)。之后分别在免疫第0天、初次免疫后第21天观察各组大鼠的心脏超声心动图;然后再分别随机地处死第一次免疫后21天以及40天各组大鼠,每组4只,取出组织以用于检测相关指标。大鼠心肌组织做HE染色,观察各组大鼠心肌的炎症情况,用间接ELISA的方法检测血清中IL-6、INF-α及NF-κB炎症因子的水平,通过流式细胞仪检测各组大鼠血清中的CD4+CD25+T细胞百分比,应用RT-PCR法分别检测大鼠心肌组织中的TLR9以及共刺激分子CLTA-4的m RNA地表达情况,用Western Blot法检测TLR9及Fgl2蛋白在大鼠心肌组织中的表达情况。结果:大鼠心脏超声检查结果显示,初次免疫后21d EAM组的心功能较NC组明显降低(P0.05),RNAi组较EAM组心功能好转(P0.05),EAM组与GFP组无差异。血清学检查显示EAM组大鼠血清INF-α及NF-κB水平在急性期达到高峰(初次免疫后21d),血清中的IL-6水平在慢性期(免疫后第40d)达到高峰,明显比其他各组增高(P0.05),RNAi组相比于EAM组炎症因子水平有所降低(P0.05),EAM组与GFP组无差异。初次免疫后的第21d,EAM组的心肌炎症评分、TLR9蛋白以及m RNA地表达量等均较其他各组增高(P0.05),RNAi组较EAM组炎症评分以及TLR9的蛋白表达量减少(P0.05),EAM组与GFP组无差异。初次免疫后的第21d的大鼠血清中CD4+、CD25+及CD4+CD25+T细胞百分比在各组之间比较,无明显差异(P0.05)。结论:实验性自身免疫性心肌炎大鼠心脏TLR9蛋白和m RNA表达上调,慢病毒介导Fgl2基因沉默可以下调TLR9蛋白表达,使TLR9蛋白和m RNA表达下降,从而使大鼠心肌炎症减轻,提示TLR9信号通路可能参与了实验性自身免疫性心肌炎的发生过程,Fgl2RNA慢病毒可以减轻心肌炎症,可能起到了预防和阻止其慢性迁延,甚至是治疗心肌炎的作用。
【关键词】：自身免疫性实验性心肌炎 Toll样受体9 Fgl2
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.21
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文缩写词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-24
• 2.1 实验材料12-14
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 主要试剂12
• 2.1.3 主要仪器12-13
• 2.1.4 主要试剂配制13-14
• 2.2 实验方法14-22
• 2.2.1 包装以及构建Fgl2RNAi慢病毒载体14
• 2.2.2 实验分组14-15
• 2.2.3 自身免疫性大鼠心肌炎（EAM）模型的构建15
• 2.2.4 Fgl2-RNAi-LV干预15
• 2.2.5 通过心脏超声心动图对大鼠心脏检测观察各组大鼠心脏功能15-16
• 2.2.6 取材16
• 2.2.7 大鼠心肌病理学检查观察心肌炎症病变情况16-17
• 2.2.8 ELISA法检测大鼠血清中炎症因子水平17-18
• 2.2.9 流式细胞仪对大鼠血清进行CD4+CD25+T细胞百分比检测18
• 2.2.10 qRT-PCR检测大鼠心肌组织中TLR9和CTLA-4 的表达情况18-20
• 2.2.11 Western Blot法检测心肌组织Fgl2和TLR9蛋白表达20-22
• 2.3 统计学分析22-24
• 第3章 实验结果24-34
• 3.1 心脏超声心动图检查24
• 3.2 大鼠心肌组织HE染色以及病理检查24-27
• 3.3 大鼠血清炎症因子水平27-29
• 3.4 大鼠血清中CD4+CD25+T细胞百分比29-31
• 3.5 大鼠心肌组织中TLR9和CTLA-4 的m RNA表达31-32
• 3.6 大鼠心肌组织中Fgl2和TLR9蛋白表达32-34
• 第4章 讨论34-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-41
• 综述41-45
• 参考文献44-45

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：756818