CVB3感染小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞后病毒滴度及PD-L1与IFN-β的表达情况

发布时间：2017-09-11 10:45

  本文关键词：CVB3感染小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞后病毒滴度及PD-L1与IFN-β的表达情况

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【摘要】：目的:病毒性心肌炎属于感染性心肌疾病,可由多种病毒感染引发,其中肠道病毒尤其是柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)是引起病毒性心肌炎最常见的原因。CVB3引发的病毒性心肌炎主要可引起病毒直接损伤与病毒感染后引起机体免疫炎症性损伤。病毒性心肌炎甚至可发展为扩张性心肌病。目前治疗病毒性心肌炎,临床缺乏有效的特异的治疗方法。因此对CVB3感染引起病毒性心肌炎的过程及干预办法的研究都势在必行。而心脏中有50%的细胞为成纤维细胞,心脏中最有功能的细胞为心肌细胞,因而有必要对CVB3感染机体后CVB3在心肌细胞及心脏成纤维细胞内的变化情况以及这两种细胞对CVB3刺激后的反应情况进行深入研究,为研究病毒性心肌炎的发生发展过程及有效治疗提供依据。方法:(1)C57BL/6小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞体外培养:无菌取C57BL/6新生小鼠心脏,剪碎,经胰酶及Ⅱ型胶原酶消化后收集细胞至6孔板中,1.5小时差速贴壁,CO2培养箱内培养。(2)小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞感染柯萨奇病毒后培养并观察细胞病变,分别取第1天,第2天,第3天,第4天,第5天,第7天,第9天的细胞上清液。(3)收集到的细胞上清液分别用Hela细胞测定病毒滴度。(4)Trizol提取细胞总RNA:心肌细胞感染柯萨奇病毒后,分别在1天、3天、5天、7天、9天后提取细胞总RNA;心脏成纤维细胞感染柯萨奇病毒后,分别在3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时后提取细胞总RNA,未处理组作为正常细胞对照组,进行Real Time PCR。结果:(1)小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞可进行体外培养且生长良好。(2)小鼠心肌细胞感染柯萨奇病毒后部分细胞出现细胞病变,取不同时间点的细胞上清液,感染Hela细胞,测定到病毒滴度-lg CCID50前4天逐渐下降,第5天、7天、9天水平为0;小鼠心脏成纤维细胞感染柯萨奇病毒后少量细胞出现细胞病变,取不同时间点的细胞上清液,感染Hela细胞,测定到病毒滴度-lg CCID50前2天逐渐下降,第3天至第9天水平为0。(3)用柯萨奇病毒感染心肌细胞后,Real Time PCR的结果显示PD-L1的m RNA表达在1天、3天持续升高,在3天达到高峰,5天略有下降,7天、9天降至正常水平以下;IFN-β的m RNA表达在1天略有下降,在3天达到第一个高峰,5天、7天降至正常水平,9天达到最高峰。用柯萨奇病毒感染心脏成纤维细胞后,Real Time PCR的结果显示PD-L1的m RNA表达在3小时略有下降,6小时回到正常水平,12小时、24小时逐渐升高,48小时、72小时降至正常水平;IFN-β的m RNA表达在3小时略有升高,6小时、12小时逐渐降至正常水平,24小时、48小时逐渐升高,72小时达到最高峰。结论:(1)CVB3感染早期主要破坏部分小鼠心肌细胞结构,诱导细胞凋亡,对心脏成纤维细胞损伤不明显,在体外培养小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞不增殖。(2)正常小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞构成性表达PD-L1和IFN-βm RNA。(3)CVB3感染小鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞后均可使得细胞内的PD-L1及IFN-βm RNA的表达出现波动性的变化。IFN-βm RNA在此两种细胞中均可出现明显的表达增高,在心脏成纤维细胞表达高于心肌细胞。
【关键词】：CVB3 病毒性心肌炎 细胞培养 PD-L1 IFN-β
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.21
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-17
• 结果17-20
• 附图20-23
• 附表23-25
• 讨论25-28
• 结论28
• 参考文献28-33
• 综述 柯萨奇病毒致病毒性心肌炎研究综述33-45
• 参考文献40-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：830229