过表达BRCC36蛋白对慢性压力负荷诱导的小鼠心肌重构的影响及机制

发布时间：2017-09-11 08:19

  本文关键词：过表达BRCC36蛋白对慢性压力负荷诱导的小鼠心肌重构的影响及机制

  更多相关文章： BRCC36 去泛素化 DNA损伤修复 心脏疾病

【摘要】：目的：探讨BRCC36蛋白在慢性压力负荷诱导的小鼠心肌肥大和纤维化中的作用及其可能作用机制。方法：1)利用商业服务构建心脏特异性过表达BRCC36的转基因小鼠(a-MHC-BRCC36),并进行鉴定。2)转基因动物完成后,通过在右无名动脉和左侧颈总动脉之间部分缩窄主动脉弓(TAC)而诱导形成慢性压力负荷模型,将制好的模型分为四组：野生型假手术组、野生型主动脉缩窄组、转基因型假手术组、转基因型主动脉缩窄组。3)模型建立8周后,检测心肌肥厚程度；将心肌样本做苏木素-伊红染色以及天狼星红染色；采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测细胞外基质结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、骨膜蛋白(Periostin)表达变化；Western blot检测p-smad3、γ-H2AX、Rad51蛋白的变化情况。结果：1)通过基因鉴定、western blot、Real-time RT-PCR检测证实在基础状态下BRCC36转基因小鼠心脏组织中BRCC36蛋白表达较野生型小鼠明显升高。2)在野生型小鼠,TAC手术组相对于假手术组在心脏重量指数、左心室重量指数、心肌细胞直径均增加,而在BRCC36心脏过表达的转基因的小鼠组,TAC诱导的心肌肥厚较野生型小鼠比较明显减轻。3)天狼星红染色结果显示：天狼星红染色可见野生型小鼠组TAC手术组血管周围以及心肌间质胶原沉积明显多于假手术组,而BRCC36转基因小鼠组TAC诱导的心肌纤维化程度较野生型小鼠组明显减轻。4)采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结果显示：野生型小鼠TAC手术组相对于假手术组心肌组织内CTGF、Periostin mRNA的表达明显升高(P0.05),而BRCC36转基因的小鼠组,TAC诱导的上述细胞外基质分子表达水平低于野生型小鼠TAC手术组(P0.05)。5)Western blot分析结果显示,在野生型小鼠,TAC手术组相对于假手术组心肌组织内p-smad3的水平显著升高,同时伴有γ-H2AX及Rad51的表达明显升高。与野生型TAC比较,转基因小鼠TAC术后心肌组织内smad3的活化得到明显抑制,同时显著降低γ-H2AX蛋白表达水平,同时显著增加Rad51蛋白表达(P0.05)。结论：心肌特异性过表达BRCC36可显著改善慢性压力负荷诱导的心肌肥厚及纤维化程度,这可能与其降低Smad3磷酸化以及促进DNA损伤修复来发挥作用有关。
【关键词】：BRCC36 去泛素化 DNA损伤修复 心脏疾病
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写词9-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 材料与方法12-22
• 2.1 实验材料12-15
• 2.1.1 实验对象12
• 2.1.2 仪器设备和设备12
• 2.1.3 主要试剂12-13
• 2.1.4 主要试剂配制13-15
• 2.2 方法15-22
• 2.2.1 小鼠基因鉴定15-16
• 2.2.2 蛋白定量16-17
• 2.2.3 组织脱水程序17
• 2.2.4 组织中提取蛋白17
• 2.2.5 Real Time-PCR步骤17-20
• 2.2.6 Western blot步骤20-22
• 第三章 实验结果22-34
• 3.1 BRCC36转基因小鼠鉴定22-24
• 3.1.1 实验材料及方法22
• 3.1.2 实验结果22-24
• 3.2 过表达BRCC36对慢性压力负荷诱导的小鼠心脏肥厚的影响24-26
• 3.2.1 实验材料及方法24
• 3.2.2 实验结果24-26
• 3.3 过表达BRCC36对慢性压力负荷诱导的小鼠心脏纤维化的影响26-28
• 3.3.1 老鼠心脏天狼星红染色结果26-27
• 3.3.2 小鼠心脏组织细胞外基质mRNA表达水平的检测27-28
• 3.4 过表达BRCC36对慢性压力负荷诱导的小鼠心肌细胞内Smad3活化的影响28-30
• 3.5 过表达BRCC36对抗慢性压力负荷下诱导的组织细胞损伤30-31
• 3.6 过表达BRCC36促进慢性压力负荷下诱导的DNA损伤修复31-34
• 第四章 讨论34-38
• 第五章 结论38
• 参考文献38-42
• 综述42-49
• 参考文献47-49
• 致谢49-50
• 攻读学位期间发表的学术论文目录50-51

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