C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响

发布时间：2017-09-16 21:28

  本文关键词：C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡和增殖的影响

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【摘要】：目的探讨C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡、增殖的影响及其机制。方法构建RNA干扰慢病毒,购买p CXN2-Flag空质粒和p CXN2-Flag-h C3G过表达人C3G m RNA质粒。分别用空白试剂、阴性慢病毒、C3G si RNA慢病毒、C3G si RNA慢病毒+空质粒、C3G si RNA慢病毒+h C3G质粒随机感染和转染H9C2心肌细胞,实验被随机分为5个组,即空白对照组、阴性对照组、沉默C3G组、沉默C3G+空质粒组和沉默C3G+过表达人C3G组。转染质粒72h后,采用RTPCR法检测目的基因C3G m RNA的表达,流式细胞术检测H9C2心肌细胞的凋亡情况,MTT比色法测定细胞增殖率,Western blotting检测细胞C3G、p-ERK1/2、Bax及Flag的蛋白表达水平。结果阴性对照组和沉默C3G组经嘌呤霉素筛选,85%以上细胞被绿色荧光蛋白标记,提示细胞被慢病毒感染。与空白对照组和阴性对照组比较,沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率均明显增加(P0.01,P0.05),且这两组细胞C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率均明显降低(P0.01,P0.05);与沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组比较,沉默C3G+过表达人C3G组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率明显降低(P0.01,P0.05),且细胞中C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率则明显增加(P0.01,P0.05)。结论沉默C3G基因能有效抑制细胞的增殖,促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G基因能逆转沉默C3G基因对H9C2心肌细胞的影响,表现为细胞凋亡减少,增殖明显,其机制可能与C3G基因对p-ERK1/2蛋白和促凋亡分子Bax的调控有关。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院老年病科;
【关键词】： CG 心肌细胞 凋亡 增殖 P-ERK/蛋白 bcl-相关X蛋白质
【基金】：国家临床重点专科建设项目(国卫办医函[2013]544号) 重庆市卫生局医学科学技术研究项目(2009-2-290,04-2-154) 重庆市科委自然科学基金计划资助项目(CSTC2007BB5276)~~
【分类号】：R542.2
【正文快照】： 大量动物模型及心脏病患者的心肌组织学研究表明,各种心肌疾病中均存在心肌细胞凋亡现象[1],它是导致心脏功能恶化、各种慢性心衰的主要因素[2-3]。目前,关于心肌细胞凋亡的分子机制还在探索阶段。近年来大量研究证明C3G参与心脏的发育、生长等多个过程[4-6]。我们前期研究发

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本文编号：865526