载脂蛋白L1的转录调控机制的研究

发布时间：2017-09-30 13:20

  本文关键词：载脂蛋白L1的转录调控机制的研究

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【摘要】：目的:探讨载脂蛋白L1(Apolipoprotein L1,Apo L1)转录调控机制。方法:1.将构建好的Apo L1启动子重组载体通过瞬时转染导入不同细胞株,48h后提取蛋白,双荧光素酶报告基因法检测Apo L1 5’端上游调控区在不同细胞株间的转录活性大小。2.利用染色质免疫共沉淀方法(Ch IP)验证反式作用因子Sp1、IRF1、IRF2与Apo L1基因启动子-80nt~+265nt区域是否可特异性结合。3.将构建好的重组载体质粒p FLAG-Sp1、p FLAG-IRF1、p FLAG-IRF2转染细胞,蛋白质印迹法(western-blot)检测细胞内源性Sp1、IRF1、IRF2表达变化。4.将重组载体质粒p FLAG-Sp1、p FLAG-IRF1、p FLAG-IRF2转染细胞,利用实时反转录聚合酶链式反应(real time RT-PCR)技术和western-blot检测Sp1、IRF1、IRF2过表达对Apo L1表达的影响。5.将合成的Sp1-si RNA、IRF1-si RNA、IRF2-si RNA转染导入细胞,western-blot验证Sp1、IRF1、IRF2沉默对细胞内源性Sp1、IRF1、IRF2表达水平的影响。6.将合成的Sp1-si RNA、IRF1-si RNA、IRF2-si RNA转染导入细胞,real time RT-PCR和western-blot验证Sp1、IRF1、IRF2沉默对Apo L1表达的影响。结果:1.构建好的Apo L1启动子重组载体通过瞬时转染导入细胞后,双荧光素酶报告基因检测luciferase荧光值。与对照组相比,Hu H7(肝癌细胞株)组luciferase荧光值增加500倍,293A(肾癌细胞株)组增加200倍,Hep G2(肝癌细胞株)组增加75倍,AGS(胃腺瘤细胞)组增加65倍,Bxpc3(胰腺癌细胞株)组增加25倍。2.在体内反式作用因子Sp1、IRF1、IRF2和Apo L1启动子区上游-80nt~+265nt区域能够特异性结合。3.Sp1、IRF1、IRF2基因过表达分别促进细胞内源性Sp1、IRF1、IRF2蛋白水平表达。4.Sp1、IRF1、IRF2基因过表达促进Apo L1转录及表达。5.Sp1、IRF1、IRF2基因沉默分别抑制细胞内源性Sp1、IRF1、IRF2蛋白水平。6.Sp1、IRF1、IRF2基因沉默抑制Apo L1转录及表达。结论:1.Apo L1启动子活性在肝肾细胞中最高。2.明确了Sp1、IRF1、IRF2转录因子直接结合Apo L1的启动子,调控Apo L1的转录。
【关键词】：载脂蛋白L1 转录调控 特异性蛋白1 干扰素调节因子1 干扰素调节因子2
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 附录一 英文缩略词表4-5
• 附录二 试剂配方5-8
• 附录三 主要仪器设备8-9
• 摘要9-11
• Abstract11-13
• 引言13-14
• 材料和方法14-26
• 结果26-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 参考文献37-40
• 致谢40-41
• 综述41-48
• 综述参考文献46-48

【共引文献】

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1 徐安然;;孟鲁司特联合舒利迭对支气管哮喘患儿血清Leptin、Eotaxin、ECP、LPO、细胞免疫及微量元素的影响[J];海南医学院学报;2013年03期

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本文编号：948420