晚期糖基化终末产物和骨髓间充质干细胞对血管内皮细胞VEGF信号通路的影响及其机制探讨

发布时间：2017-10-09 09:25

  本文关键词：晚期糖基化终末产物和骨髓间充质干细胞对血管内皮细胞VEGF信号通路的影响及其机制探讨

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【摘要】：目的:以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为实验对象,通过晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)干预以及人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,h MSCs)与HUVEC共培养,应用Western blot、PCR等方法检测内皮细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体和下游PI3K/AKT/e NOS信号通路的表达变化,探讨VEGF信号通路在糖尿病大血管病变血管新生障碍中的病理改变和机制以及间充质干细胞对糖尿病患者血管新生促进作用的影响机制。方法:人脐静脉内皮细胞、人骨髓间充质干细胞常规培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。实验分三组:AGE组、AGE+MSC共培养组,空白对照组(不加任何刺激因素)。对照组常规培养HUVEC;AGE组以400ug/ml浓度的AGE与HUVEC共孵育36小时(已经通过预实验确定AGE最佳干预浓度和干预时间,具体见后。);AGE+MSC共培养组在400ug/ml AGE环境下将MSC与HUVEC共培养36小时。36小时后提取各组HUVEC的蛋白和m RNA并留取细胞培养上清液备用。采用Western blot、PCR方法检测3组内皮细胞的VEGF、VEGFR-1(F1t-1)、VEGFR-2(KDR/Flk-1)、s F1t-1(soluble VEGFR-1)、p-AKT、p-e NOS的表达。统计学方法采用SPSS17.0软件包进行数据分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组之间的比较采用独立样本t检验,P0.05即认为有统计学意义。结果:1 AGE影响VEGF-A和VEGFR的表达AGE干预后,内皮细胞VEGFA、s Flt-1 m RNA表达(3.747±0.415)与对照组(1.007±0.139)相比升高,差异有统计学意义(P0.05);VEGFR-2m RNA表达与对照组相比减弱,差异有统计学意义(P0.05);400ng/ml AGE干预36小时后,内皮细胞VEGFR-1蛋白表达(93.129±4.620)与对照组(557.395±9.383)相比下降,差异有统计学意义(P0.05);VEGFR-2蛋白表达(63.791±7.98)与对照组(571.995±12.65)相比下降,差异有统计学意义(P0.05)。2 AGE影响PI3K/AKT/e NOS信号通路的表达400ng/ml AGE干预36小时后,内皮细胞p-AKT蛋白表达(86.408±3.255)与对照组(482.325±39.859)相比减弱,差异有统计学意义(P0.05);p-e NOS蛋白表达(187.69±20.732)与对照组(426.96±50.063)相比亦减弱,差异有统计学意义(P0.05)。3与MSC共培养对内皮细胞VEGFR的表达的影响AGE干预后,内皮细胞s Flt-1 m RNA表达与对照组相比升高,经与MSC共培养后,s Flt-1 m RNA(2.048±0.245)表达与AGE组相比下降(P0.05);AGE干预后,内皮细胞表面VEGFR-1与正常对照组相比表达下降,经与MSC共培养后,VEGFR-1(319.43±3.649)蛋白表达与AGE组相比升高(P0.05);AGE干预后,内皮细胞表面VEGFR-2与正常对照组相比表达明显下降,经与MSC共培养后,VEGFR-2(202.81±48.879)蛋白表达与AGE组相比升高(P0.05)。4与MSC共培养对内皮细胞PI3K/AKT/e NOS信号通路的表达的影响AGE干预后,p-AKT、p-e NOS与正常对照组相比表达明显减弱,经与MSC共培养后,p-AKT蛋白表达(238.385±30.384)与AGE组相比升高(P0.05),p-e NOS蛋白表达(255.545±9.227)与AGE组相比亦升高(P0.05),VEGF信号传导有所增强。结论:1 AGE对VEGF受体造成破坏,使抑制性受体表达增多,从而削弱其下游信号通路的传导,造成内皮细胞功能障碍,影响血管新生;2 MSC对糖尿病患者的血管新生产生促进作用可能部分通过影响VEGF受体及其下游的信号通路。
【关键词】：晚期糖基化终末产物 人脐静脉内皮细胞 人骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子受体 PI3K/AKT/eNOS信号转导途径
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R543
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-21
• 结果21-23
• 附图23-27
• 讨论27-30
• 结论30
• 参考文献30-33
• 综述 血管内皮生长因子受体在血管新生中的作用研究进展33-42
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 个人简历43

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本文编号：999406