CEACAM16基因新突变导致遗传性耳聋的分子机制研究

发布时间：2017-10-10 22:08

  本文关键词：CEACAM16基因新突变导致遗传性耳聋的分子机制研究

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【摘要】：研究背景：DFNA4是常染色体显性遗传性非综合征型耳聋的一个基因座位,最初是由于发现了定位于染色体19q13.33上的MYH14基因突变而被命名。2011年,Zheng J等人首次在美国1070家系中发现了DFNA4座位上的一个新的致聋基因CEACAM16,并通过生物信息学分析和体外实验初步鉴定了CEACAM16基因编码蛋白的相关功能。2013年,本研究团队收集了一个来自中国湖南省五代遗传的常染色体显性遗传家系(SY-026),通过采取传统的全基因扫描连锁分析法与最新的外显子组测序技术相结合的策略,发现了位于CEACAM16基因上的一个新突变位点,即位于4号外显子上的c.505GA (p.G169R),该突变在家系中共分离,提示其为一个新的CEACAM16基因致聋突变位点。这是世界第二例、国内首例CEACAM16基因致聋突变,意义重大。 在本研究中,我们对本研究团队前期发现的CEACAM16基因新突变开展了一系列体外实验,以了解此突变位点对蛋白结构、功能及定位的影响。 目的：观察CEACAM16基因野生型及其突变型G169R在体外细胞中的表达与定位,以探讨该突变可能的致聋机制。 方法：以获赠质粒为模板,构建带C-端Flag的目的真核表达质粒pRK5-CEACAM16-Flag (野生型)及pRK5-G169R-Flag(突变型)。将上述构建成功的两种质粒瞬时转染293T细胞,48小时后分别提取细胞蛋白及上清蛋白,行Western blot检测野生及突变蛋白的胞内表达量及其各自的胞外分泌情况。细胞免疫荧光检测野生蛋白和突变蛋白的亚细胞分布情况。 结果：1.成功构建了野生型pRK5-CEACAM16-Flag质粒及突变型pRK5-G169R-Flag质粒,并经双酶切及测序鉴定。 2.用Western blot检测CEACAM16野生型及G169R突变型与Flag融合蛋白在293T细胞中的表达,发现表达后的两种蛋白分子量大小与预期相符,存在多聚体形式,且在胞内和胞外均可检测到目的蛋白,但突变蛋白的胞外分泌量较野生蛋白明显减少。 3.细胞免疫荧光实验发现,CEACAM16野生蛋白和G169R突变蛋白均主要分布在细胞质中,无明显的区域聚集现象,且两者在胞内的分布无明显差异。 结论：CEACAM16基因的新突变G169R可致突变蛋白的细胞外分泌量减少,但不影响突变蛋白在细胞内的分布。
【关键词】：CEACAM16基因 新突变 分泌蛋白 功能
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文~.略词表11-12
• 前言12-14
• 第一章 CEACAM16野生型基因重组真核细胞表达质粒及其突变型的构建及鉴定14-37
• 1.1 引言14
• 1.2 材料与方法14-29
• 1.3 结果29-35
• 1.4 讨论35-37
• 第二章 CEACAM16野生型和突变型质粒的蛋白表达研究37-53
• 2.1 引言37
• 2.2 材料与方法37-48
• 2.3 结果48-49
• 2.4 讨论49-53
• 第三章 CEACAM16野生型和突变型蛋白亚细胞定位的实验研究53-61
• 3.1 引言53
• 3.2 材料与方法53-58
• 3.3 结果58-59
• 3.4 讨论59-61
• 第四章 结论61-62
• 参考文献62-65
• 综述65-82
• 参考文献74-82
• 致谢82-83

【参考文献】

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1 文显梅;魏蕾;张京伟;彭小春;王婷婷;张利军;李华;;苦参碱对HeLa细胞粘附和移动的抑制作用及机制[J];武汉大学学报(医学版);2006年02期

2 冯永;王鸿涵;;非综合征型遗传性聋研究现状及思考[J];听力学及言语疾病杂志;2012年03期

3 王秋菊;赵亚丽;兰兰;赵翠;韩明鲲;韩东一;;新生儿聋病基因筛查实施方案与策略研究[J];中华耳鼻咽喉头颈外科杂志;2007年11期

4 孙燕,刘博,戴海江,刘捤,杜延顺,陈秀伍,赵丽萍;梅尼埃病患者COCH基因第4和5外显子突变研究[J];中华医学杂志;2005年05期

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本文编号：1008854