碱性成纤维细胞生长因子滴眼液对苯扎氯铵诱导小鼠干眼的疗效和机制

发布时间：2017-10-12 17:28

  本文关键词：碱性成纤维细胞生长因子滴眼液对苯扎氯铵诱导小鼠干眼的疗效和机制

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【摘要】：目的探讨碱性成纤维细胞生长因子滴眼液(bFGF)对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及其可能的机制。 方法选用BALB/c雄性小鼠75只（150眼），使用0.2％的苯扎氯铵溶液局部滴眼以诱导干眼。在诱导的第23天时根据泪膜破裂时间、角膜荧光染色、炎症指数等参数选择干眼表现程度相似的眼并随机分为A、B、C、D四组。A组为干眼对照组，B、C、D组分别为溶剂对照组，5000IU碱性成纤维细胞生长因子滴眼液治疗组，25000IU碱性成纤维细胞生长因子滴眼液治疗组。治疗后第0、1、3、5天进行角膜炎症程度的评估、泪膜破裂时间及角膜上皮荧光素钠染色。治疗结束后摘取小鼠眼球，进行HE及过碘酸-希夫（PAS）染色，Ki-67免疫组化，角蛋白19（cytokeratin19，K19）免疫荧光标记，以及Western blot检测角结膜组织中MUC-1及P63表达水平，分析各组差异。 结果经筛选共80只眼入选进行治疗实验，每组20只眼。统计结果显示治疗后第0、1、3天各组角膜炎症程度、泪膜破裂时间及角膜上皮荧光素钠染色无统计学差异。在治疗第5天后，A、B、C、D各组的泪膜破裂时间分别是（2.176±0.828）、（1.941±0.464）、（2.389±0.719）、（2.833±0.924），其中C、D两组的BUT较A、B组延长，，且D组表现更明显，差异具有统计学意义（F=4.426，P=0.007）；各组间角膜荧光染色评分、炎症指数无显著性差异（F=0.401，P=0.753）、（F=0.719，P=0.544）。HE结果显示bFGF治疗组角膜上皮厚度与正常眼相当，且C、D两组角膜上皮较A、B两组光滑规整；PAS染色显示bFGF滴眼液治疗组杯状细胞数量与正常眼相当，均相对多于A组和B组，但差异无统计学意义（F=4.481，P=0.060），然而，bFGF滴眼液治疗组能增加角膜MUC-1的表达水平。同时，bFGF滴眼液治疗组能显著增加干眼状态下角膜上皮Ki-67（F=73.418，P=0.000）及K19的阳性细胞数量，增加P63在角膜的表达，减少角膜上皮K10的表达；此种作用在D组更为明显。 结论碱性成纤维细胞生长因子滴眼液对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼有一定的治疗作用，改善泪膜破裂时间、增强角膜上皮损伤修复为其可能的作用机制。
【关键词】：干眼 碱性成纤维细胞生长因子 滴眼液 小鼠 治疗
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R777.34
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-21
• 2.1 材料与设备12-14
• 2.1.1 主要耗材与试剂12-13
• 2.1.2 主要器械与设备13-14
• 2.2 构建小鼠干眼模型14-15
• 2.2.1 构建小鼠干眼模型的方法14
• 2.2.2 评价小鼠干眼模型的指标14-15
• 2.2.3 选择干眼模型组别的方式15
• 2.3 实验方法15-21
• 2.3.1 冰冻切片16
• 2.3.2 苏木素-伊红染色 （H&E 染色）16-17
• 2.3.3 石蜡切片17
• 2.3.4 过碘酸-希夫染色（PAS 染色）17-18
• 2.3.5 组织切片免疫荧光染色18-19
• 2.3.6 组织切片免疫组织化学染色19-20
• 2.3.7 Western blot 蛋白检测20-21
• 2.4 统计学分析21
• 结果21-26
• 3.1 BAC 诱导小鼠干眼模型结果21-22
• 3.2 药物治疗后临床指标的结果22-26
• 3.2.1 bFGF 对泪膜稳定，角膜组织形态的影响22-23
• 3.2.2 bFGF 对角膜上皮细胞增殖的影响23-24
• 3.2.3 bFGF 对角膜鳞状上皮化生的影响24-25
• 3.2.4 bFGF 对杯状细胞及粘蛋白的影响25-26
• 讨论26-30
• 结论30-31
• 参考文献31-36
• 附录1. 缩略词索引36-38
• 附录2. 综述38-49
• 参考文献44-49
• 附录3.硕士期间相关成果目录49-50
• 致谢50-51

【共引文献】

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本文编号：1019997