siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO表达的影响

发布时间：2017-10-17 16:35

  本文关键词：siRNA沉默HIF-1α对缺氧培养的人脉络膜黑色素瘤细胞EPO表达的影响

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【摘要】：目的：采用阳离子脂质体介导的转染方法,以RNA干扰为手段,研究HIF-1α-siRNA对缺氧培养的人眼脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)转染前后缺氧条件下HIF-1α和EPO的表达,初步探讨HIF-1α在缺氧条件下对人眼脉络膜黑色素瘤的调控作用。 方法：正常组OCM-1细胞采用含10%胎牛血清、1%双抗(青-链霉素混合液)的DMEM高糖培养基培养,将细胞置37℃、5%CO2细胞培养箱内培养,取处于对数期生长的细胞用于实验研究。缺氧组OCM-1细胞在原培养基中加入COCl2至浓度为100μmol/L用于模拟肿瘤内部乏氧微环境。并将缺氧组细胞分为单纯缺氧组、干扰组、阴性对照组、阳性对照组、脂质体对照组；设计并合成siRNA(siRNA+阴性对照+阳性对照),并在基因库进行Blast同源性分析。利用阳离子脂质体Lipofectamille2000Reagent为载体将合成的siRNA转入脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1内。RT-PCR检测OCM-1细胞HIF-1α及EPO在RNA水平上的表达情况,Western blot检测HIF-1α及EPO蛋白表达情况。 结果：缺氧组各组之间相比,阳性对照组β-actin mRNA表达下降(p＜0.01),证实转染成功；单纯缺氧组与常氧组相比,HIF一1α mRNA表达无明显差异(p＞0.05),蛋白表达显著升高(p＜0.01),而EPO mRNA和蛋白的表达均显著升高(p＜0.01)。干扰组HIF-1α禾EPO mRNA和蛋白表达均明显下降(p＜0.01),阴性对照组与脂质体对照组相比各检测因素均无明影差别(p＞0.05)。 结论： 1.在缺氧状态下OCM一1细胞HIF-1αm RNA表达无明显变化,蛋白水平表达升高；EPO的mRNA和蛋白表达量均增加。 2.合成的HIF-1α-siRNA通过转染OCM-1细胞后,HIF-1α mRNA和蛋白表达量均下调；EPO的mRNA和蛋白表达量也均下调。 3.EPO作为HIF-1α的下游靶基因,其表达HIF-1α调控。
【关键词】：脉络膜黑色素瘤 缺氧诱导因子-1α 促红细胞生成素 小片段干扰RNA RNA干扰
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.7
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料与方法10-23
• 1.1 实验材料与仪器10-13
• 1.1.1 实验材料10-11
• 1.1.2 实验仪器11-12
• 1.1.3 常用液体的配制与消毒12-13
• 1.2 实验方法13-22
• 1.2.1 OCM-1细胞的培养及传代13-14
• 1.2.2 OCM-1细胞的转染14-15
• 1.2.3 OCM-1细胞HIF-1α、EPO基因及其表达15-22
• 1.3 统计学分析22-23
• 第二章 结果23-30
• 2.1 细胞培养结果23
• 2.2 细胞转染结果23-24
• 2.3 RT-PCR结果24-26
• 2.3.1 HIF-1α mRNA表达结果分析24-25
• 2.3.2 EPO mRNA表达结果分析25-26
• 2.4 Western Blot结果26-30
• 2.4.1 HIF-1α蛋白表达结果分析27-28
• 2.4.2 EPO蛋白表达结果分析28-30
• 第三章 讨论30-33
• 第四章 结论33-34
• 参考文献34-36
• 综述36-45
• 参考文献42-45
• 攻读学位期间的研究成果45-46
• 附录46-49
• 致谢49-50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1049900