A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达

发布时间：2017-10-21 12:32

本文关键词：A546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建及体外表达

【摘要】：目的构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体和体外转染体系,为研究野生型及A546D突变型TGFBI基因的功能提供实验基础。方法应用重叠延伸PCR法定点诱变,构建A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人角膜上皮(human corneal epithelium,HCE)细胞,Western Blot法检测转染后培养基中HCE细胞分泌的TGFBI蛋白的表达。结果重组质粒总长约7.5 kb,由HindⅢ、XbaⅠ双酶切鉴定产生5.4 kb和2.1 kb两条片段者为克隆正确质粒。测序鉴定证实了TGFBI基因编码区完整插入到载体pcDNA3.1的多克隆位点中,突变载体的第1685位碱基由C替换为A,使其编码的第546个氨基酸由Ala突变为Asp即A546D突变。野生型及A546D突变型载体转染入HCE细胞后,TGFBI蛋白有效表达。结论成功构建了A546D突变型TGFBI基因真核表达载体,为TGFBI基因相关性角膜营养不良致病机制的研究奠定了基础。
【作者单位】：哈尔滨医科大学附属第一医院眼科;黑龙江省中医药大学附属第一医院普外科;哈尔滨医科大学遗传学教研室;
【关键词】： TGFBI 重叠延伸PCR 人角膜上皮细胞 转染
【基金】：黑龙江省博士后科研启动基金(编号:LBH-Q13126) 黑龙江省卫生厅科研基金(编号:2012-554) 哈医大一院科研基金(编号:2011BS017)~~
【分类号】：R772.2
【正文快照】： 1997年Munier等[1]首次确定了TGFBI为导致角膜营养不良的致病基因,目前已经确定由TGFBI基因突变所导致的角膜营养不良类型有颗粒状角膜营养不良,Avellino角膜营养不良,Reis-Bücklers和Thiel-Behnke角膜营养不良,格子状角膜营养不良LCDⅠ、Ⅱ、Ⅲ、ⅢA型及Ⅵ型[2]。基因突变分

【共引文献】

中国期刊全文数据库前1条

1 Su-Juan Zhao;Ya-Nan Zhu;Xing-Chao Shentu;Qi Miao;;Chinese family with atypical granular corneal dystrophy type I caused by the typical R555W mutation in TGFBI[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年04期

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【相似文献】

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