Sirtuins在喉癌细胞及其耐药株中表达水平的实验研究

发布时间：2017-10-28 11:09

  本文关键词：Sirtuins在喉癌细胞及其耐药株中表达水平的实验研究

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【摘要】：目的：喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，治疗手段通常为手术辅以抗肿瘤综合治疗，尽管几十年来对其治疗水平不断挺高，但据统计喉癌患者的5年生存率并没有呈现显著的提升。细胞多药耐药的产生是导致化疗效果欠佳的重要因素，细胞耐药相关基因MDR1及MRP可通过两种不同途径介导细胞产生耐药性。Sirtuins基因与细胞应激及氧化所致疾病有着密切的关联，，其在不同肿瘤发生发展中的作用已逐渐被知晓，但Sirtuins在喉癌细胞及其耐药株中所发挥的作用仍不明确，本研究拟探讨Sirtuins在人喉癌细胞株Hep-2及其耐药株Hep-2/v中的表达及调控作用，以及Sirtuins与耐药基因的相关性，为喉癌的抗肿瘤治疗提供新的可能的途径。 方法：通过实时定量RT-PCR对Sirtuins和MDR1在Hep-2和Hep-2/v中的表达进行定量分析，采用免疫荧光染色检测Sirtuins及耐药相关基因MDR1、MRP在Hep-2和Hep-2/v中的表达情况，利用免疫组化SP染色方法检测14例喉癌的组织标本中Sirtuins、MDR1及MRP基因的表达水平，并将结果进行统计分析。 结果：1.实时定量RT-PCR结果显示，多药耐药性人喉癌细胞Hep-2/v中Sirtuins蛋白及MDR1的mRNA水平较Hep-2中明显升高； 2.免疫荧光染色显示，多药耐药性人喉癌细胞Hep-2/v中SirT1、SirT3、SirT6、MDR1及MRP蛋白表达水平较Hep-2中显著提高。 3.免疫组化结果显示，SirT1、SirT3、SirT6、MDR1及MRP抗体阳性表达为棕黄色颗粒，均定位于细胞浆。在喉癌组织中以上5种抗体的蛋白表达较癌旁组织均有所增高。对喉癌及癌旁组织中MDR1和MRP的蛋白表达量与Sirtuins表达的关系进行直线回归分析，结果显示： MDR1蛋白表达量与SirT1的变化呈正的直线相关（r=0.4，p0.01），MRP蛋白表达量与SirT6的变化呈正的直线相关（r=0.61, p0.01）。 结论：Sirtuins蛋白在多药耐药性人喉癌细胞中的高表达，提示其可能在喉癌细胞耐药机制中发挥着重要作用，并与肿瘤多药耐药性基因MDR1、MRP的转录和表达相关。推测未来可能采用Sirtuins抑制剂或基因靶向治疗，为人喉癌及其他相关肿瘤耐药性的治疗提供了一种新的方法。
【关键词】：Sirtuins MDR1 MRP 喉癌 耐药
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-22
• 1.1 引言11-12
• 1.2 综述去乙酰化酶 SIRTUINS 与肿瘤关系的研究进展12-22
• 1.2.1 Sirtuins 蛋白的分类和分子功能13-14
• 1.2.2 Sirtuins 的细胞定位与生物活性14-16
• 1.2.3 Sirtuins 与肿瘤发生及对肿瘤相关基因的调控16-18
• 1.2.4 Sirtuins 蛋白抑癌作用的相关研究18-21
• 1.2.5 展望21-22
• 第2章 SIRTUINS 在喉癌细胞及其耐药株中的表达与意义22-39
• 2.1 实验材料与方法23-31
• 2.1.1 细胞株23
• 2.1.2 主要仪器23-24
• 2.1.3 主要试剂24-25
• 2.1.4 试剂配制25-27
• 2.1.5 实验方法27-31
• 2.2 结果31-35
• 2.2.1 实时定量 RT-PCR 检测 Sirtuins 蛋白的表达31-32
• 2.2.2 免疫荧光检测细胞中 Sirtuins 蛋白的表达32-35
• 2.3 讨论35-39
• 第3章 SIRTUINS 在喉癌细胞组织中表达的临床意义39-48
• 3.1 实验材料与方法39-41
• 3.1.1 标本来源及临床资料39
• 3.1.2 主要仪器39
• 3.1.3 主要试剂39-40
• 3.1.4 试剂配制40
• 3.1.5 免疫组织化学染色40-41
• 3.2 结果41-45
• 3.2.1 免疫组化样本统计41-42
• 3.2.2 免疫组化染色检测 MDR1 及 MRP 在喉组织中的表达42-43
• 3.2.3 免疫组化染色检测 Sirtuins 在喉组织中的表达43
• 3.2.4 Sirtuins 及耐药基因在喉组织中表达的相关性43-45
• 3.3 讨论45-48
• 第4章 全文总结48-49
• 参考文献49-55
• 作者简介及在读期间取得的科研成果55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 杨征;黄志刚;钟琦;范尔钟;付维;杨登化;;喉癌中p53与MDR1及MRP表达的相关性研究[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2008年05期

2 时小燕;杜丽敏;;Sirtuin家族成员及其生物学特性[J];国际药学研究杂志;2011年05期

3 吴德峰;刘承宜;朱玲;;SIRTUIN1介导的NIH3T3成纤维细胞昼夜节律时钟基因表达抑制的光生物调节作用[J];体育科学;2011年02期

4 尹万忠;王苹;祝威;;人喉癌长春新碱耐药细胞株的建立及其生物学特性[J];中国免疫学杂志;2010年02期

本文编号：1107966