联合阻断STAT3和HIF-1α对低氧条件下喉癌Hep-2细胞放疗及化疗的增敏作用

发布时间：2017-10-28 19:01

  本文关键词：联合阻断STAT3和HIF-1α对低氧条件下喉癌Hep-2细胞放疗及化疗的增敏作用

  更多相关文章： STAT3 HIF-1α 喉癌 顺铂 放疗

【摘要】：目的：信号转导子和转录激活子3（signal transducer and activator of transcription3, STAT3）信号通路在人类多种肿瘤中持续激活，影响肿瘤细胞增殖、凋亡、浸润及转移。低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是机体在低氧条件下产生的一个转录因子，它能调节多种低氧反应基因的转录。本实验通过单独和联合抑制喉癌Hep-2细胞中HIF-1α和STAT3的表达探讨低氧微环境下HIF-1α和STAT3对喉癌Hep-2细胞放疗及化疗抵抗作用的影响。 方法： 首先分别在37℃、5%CO2、20%O2和95%湿度条件下的恒温培养箱中培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞和稳定转染HIF-1αshRNA的Hep-2（Hep-2HIF-1α-/-）细胞，取对数生长期细胞，分别用于以下实验： 1分别于常氧及低氧条件下培养Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞，Western Blot检测HIF-1α的表达情况。 2低氧条件培养喉癌Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞，予不同浓度的AG490（0μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml）作用24h用MTT法检测细胞增殖情况。 3以50μg/ml的AG490作用于喉癌Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞，Western Blot检测细胞中HIF-1α、P-STAT3的表达情况。 4以50μg/ml的AG490分别与不同放射剂量（0Gy、5Gy、10Gy、15Gy、20Gy）的放射线照射及不同浓度顺铂（0μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml）联用，用MTT法检测细胞增殖情况。 结果： 1AG490在体外低氧条件下能够有效的抑制Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞的生长，且具有浓度依赖性，随机区组设计资料的方差分析显示：各浓度处理组细胞存活率的总体均数间差异具有统计学意义，（F=572.884, P0.01）；Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞组间的细胞存活率的差异也具有统计学意义，（F=160.114，P0.01）。且相同浓度下对Hep-2HIF-1α-/-细胞存活率的影响强于Hep-2细胞。 2Western blot结果显示AG490在浓度为50μg/ml时明显抑制P-STAT3的表达，无论是在Hep-2细胞（t=6.0927,P0.01），还是在Hep-2HIF-1α-/-细胞(t=8.6536,P0.01)，均具有统计学意义。在没有AG490的作用下，沉默HIF-1α对P-STAT3的表达的影响不大，(t=2.1421,P0.05)，没有统计学意义。然而AG490抑制P-STAT3后HIF-1α的表达受到影响，(t=3.5626,P0.05)，差异具有统计学意义。 3AG490联合放疗与化疗与单独应用放、化疗干预Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞相同时间，MTT结果显示：（1）单独放射线照射可以抑制Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞的增殖。Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞组间的细胞抑制率的差异也具有统计学意义。联合50μg/mlAG490时各放射剂量对喉癌细胞的抑制作用增强，明显高于单独应用相同剂量的放射线照射。（2）顺铂在体外低氧条件下能够有效的抑制Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞的生长，且具有浓度依赖性，（F=10.646, P0.05）；Hep-2细胞及Hep-2HIF-1α-/-细胞组间的细胞抑制率的差异也具有统计学意义，（F=402.043，，P0.001）。50μg/ml的AG490联合顺铂用药组，当0.5μg/ml顺铂作用于Hep-2细胞时q值小于1.15，其余各组q值均大于1.15，说明50μg/ml的AG490与0.5μg/ml的顺铂对喉癌细胞的抑制为相加作用，而与1.0μg/ml顺铂、2.0μg/ml顺铂、5.0μg/ml顺铂起协同作用，OD图可见曲线右移，也提示协同作用的存在。 结论： 1单独抑制STAT3、HIF-1α均可抑制细胞的增殖。 2联合抑制STAT3和HIF-1α可增加喉癌细胞的放射治疗和化疗的敏感性。
【关键词】：STAT3 HIF-1α 喉癌 顺铂 放疗
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-18
• 结果18-21
• 附图21-25
• 附表25-27
• 讨论27-30
• 结论30-31
• 参考文献31-33
• 综述 HIF-1α与恶性肿瘤的关系33-41
• 参考文献37-41
• 致谢41-42
• 个人简历42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 李震;屈永涛;李晓明;路秀英;张佳宁;;缺氧诱导因子1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌的放疗增效作用[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2010年11期

2 吴民华;陈小毅;蔡康荣;;JAK激酶抑制剂AG490对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响[J];癌症;2009年01期

3 王俊阁;李晓明;路秀英;;JAK激酶抑制剂AG490联合顺铂对喉癌细胞STAT3信号转导通路的抑制作用[J];第四军医大学学报;2007年21期

4 刘春玲;李晓明;路秀英;张立坤;;HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2007年13期

5 王俊阁;李晓明;陈英会;路秀英;;信号转导和转录激活因子3在喉癌组织中的表达及临床意义[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2007年03期

6 周玉玲,邓长生;大肠腺癌组织中的Glut1和HIF-1α蛋白表达及其与癌细胞增殖的相关性[J];癌症;2005年06期

7 李力,李玉军;缺氧诱导因子-1α的表达与胰腺癌细胞增殖和凋亡研究[J];实用癌症杂志;2005年01期

本文编号：1109501