Pou4f3基因突变致小鼠耳聋的听力学机制研究

发布时间：2017-11-01 05:00

  本文关键词：Pou4f3基因突变致小鼠耳聋的听力学机制研究

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【摘要】：【目的】Pou4f3 8碱基缺失突变可引起DFNA15非综合征型语后聋,是临床较常见的显性遗传性聋。至今人们仍无法了解该疾病的临床病理全过程,亦无有效的预防及对因治疗方法。本课题以完全模拟人DFNA15的突变方式及遗传规律而建立的Pou4f3点突变小鼠为模型,探究DFNA15耳聋的发病机制。【方法】利用构建的Pou4f3点突变小鼠,经基因型鉴定将小鼠分为突变组(Pou4f3mutant/+)及对照组(Pou4f3+/+),在前期已对5周至9月龄小鼠的听力测试的基础上又分别选取年龄比较大的小鼠(12-13月龄、16-17月龄),分别行听性脑干反应(ABR)对其听功能进行测定;选取4-5月龄小鼠进行畸变产物耳声发射检查(DPOAE);行为学方法分析小鼠前庭功能;透射电镜分析耳蜗毛细胞的超微结构,完善小鼠的表型及形态学分析。通过构建p GL3Basic-Espin/Myo6启动子表达载体,并与Pou4f3野生型及Pou4f3(8bp缺失)突变型载体共转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测系统体外分析转录因子Pou4f3野生型及突变型对Espin及Myo6基因的表达调控影响。【结果】ABR结果示:Pou4f3mutant/+出生时听力正常,与对照组无明显差异(P0.05)。随着年龄的增大,听功能呈进行性缓慢下降,并逐渐发展为全频听功能阈值升高,听力图呈缓降型,当年龄达12月以上时Pou4f3mutant/+及Pou4f3+/+小鼠听力表现为重度甚至极重度耳聋,未见明显差异。DPOAE结果显示突变及对照小鼠其畸变产物耳声发射均可引出,但突变小鼠DPOAE振幅明显减低,各频率对照及突变组差异均匀意义(P0.05)。透射电镜观察耳蜗毛细胞的超微结构显示Pou4f3mutant/+小鼠内毛细胞中出现线粒体明显水肿,空化的现象。我们成功构建了p GL3 Basic-Espin/Myo6启动子表达载体,双荧光素酶报告基因系统检测示:野生型的转录因子POU4F3可以负调控Espin基因的表达,对Myo6基因的表达与本底表达无明显差别,但导入突变型POU4F3可明显上调Espin基因的表达,而抑制Myo6基因表达。【结论】Pou4f3基因突变后影响内毛细胞线粒体的结构功能,进而影响内毛细胞对声音的感知,为DFNA15提供可能的细胞学机制。DFNA15型耳聋的发病机制之一,可能是由于转录因子POU4F3突变,产生一截短的具有显性负效应的突变体蛋白,影响下游Espin、Myo6基因的表达,进而导致毛细胞纤毛的极性生长,出现纤毛融合及巨纤毛现象,使外来信号机电转换过程异常,最终引起听功能下降。
【关键词】：Pou4f3(Brn3.1/Brn3c) DFNA15 静纤毛 Espin Myo6
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 第一部分Pou4f3~(mutant/+)小鼠的表型分析及形态学研究10-36
• 材料与方法12-20
• 实验结果20-30
• 讨论30-33
• 参考文献33-36
• 第二部分 转录因子Pou4f3对Espin、Myo6基因的表达调控影响36-66
• 材料与方法37-53
• 实验结果53-60
• 讨论60-63
• 参考文献63-66
• 第三部分 文献综述66-78
• 参考文献73-78
• 附录 缩略词表78-80
• 硕士期间发表论文80-82
• 致谢82

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本文编号：1125314