恒河猴骨髓间充质干细胞体内及体外诱导为角膜内皮细胞的研究

发布时间：2017-11-08 14:09

  本文关键词：恒河猴骨髓间充质干细胞体内及体外诱导为角膜内皮细胞的研究

  更多相关文章： 骨髓间充质干细胞 角膜内皮细胞 Transwell非接触共培养系统 恒河猴

【摘要】：目的将体外培养的恒河猴骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)移植于角膜内皮细胞失代偿的角膜内表面,分时段观察细胞形态及功能改变,分析体内诱导BMSCs致角膜内皮细胞化的可行性。同时对BMSCs诱导为角膜内皮细胞(Corneal endothelial cells, CECs)的体外环境条件进行初步探索。 方法恒河猴8只,随机分为两组：实验组(6只)、对照组(2只)；应用超声乳化技术破坏CECs制作角膜内皮细胞功能失代偿模型。采用密度梯度离心法分离培养幼猴BMSCs,经鉴定、Brdu标记后应用前房注射法移植入损伤后的角膜内表面。术后观察角膜透明度、眼压、角膜水肿程度、角膜及虹膜有无新生血管、前房深度、瞳孔大小、房水浑浊程度,主观上观察BMSCs移植后对正常角膜组织结构及代谢功能的影响；术后1月、2月、3月摘取术眼角膜植片进行病理切片(HE染色)、扫描电镜及透射电镜检测,从客观上观察替代移植后BMSCs的分布状况、形态学改变、连接状态及生长趋势；行抗Brdu单克隆抗体免疫组织化学染色及神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色,以判断角膜植片内表面的细胞是否为移植的细胞,以及移植后的细胞是否表达角膜内皮细胞特异性表面分子。揭膜消化法分离培养幼猴角膜内皮细胞,形态学观察及NSE免疫组化染色法进行鉴定；采用BMSCs和CECs置于Transwell非接触共同培养体系以及应用含有角膜内皮失代偿恒河猴前房水的培养基对BMSCs进行培养两种方式对BMSCs进行体外诱导,观察BMSCs形态学变化并采用NSE免疫组织化学染色行细胞鉴定。 结果超声乳化损伤角膜内皮后成功建立了角膜内皮功能失代偿模型,角膜透明度逐渐下降。实验组BMSCs移植入前房后,实验组角膜透明度于2周后开始逐渐增加。电镜观察见：1月时细胞成叠加生长,细胞间连接较少；2月时细胞间连接较前增加；3月时细胞类似单层生长,细胞间连接较多,但存在细胞窗；形态上细胞逐渐由长梭形向短梭形及多边形靠拢。对照组角膜混浊不能恢复,可见新生血管长入；电镜下观察见后弹力层裸露,无细胞覆盖,偶可见残存角膜内皮细胞,贴附不牢固。体外诱导的两种方法：Transwell共培养法及房水-培养基诱导法,分别于第3周及第2周采用NSE法鉴定出阳性结果,细胞形态上改变不甚明显；重复诱导一次结果相同。 结论体外培养的同种异体BMSCs采用改良的前房注射法植入损伤后的恒河猴角膜内表面后可在一定程度上替代角膜内皮细胞,发挥它的泵功能,且能部分表达内皮细胞表面相关蛋白。Transwell非接触共培养及房水-培养基法均可体外诱导BMSCs分化为角膜内皮样细胞。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R772.2

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民;骨髓间充质干细胞的分离与培养[J];第三军医大学学报;2001年05期

2 罗飞;间充质干细胞在组织工程中的研究进展[J];第三军医大学学报;2003年02期

3 易伟斌;胡竹林;徐岩泽;王廷华;黄桂琴;陈娟;罗哲文;;兔血管内皮细胞对角膜后弹力层代谢的影响[J];国际眼科杂志;2007年04期

4 张红言;王军;;不同粘弹剂在复杂性白内障超声乳化术中的临床观察[J];国际眼科杂志;2008年06期

5 吴子东;钟景贤;麦圣龙;郑敏;郑卡;;白内障超声乳化对糖尿病患者角膜内皮的影响[J];国际眼科杂志;2008年09期

6 张海良;马翔;王琪;孙洪臣;;bFGF缓释微囊颗粒诱导角膜新生血管形成治疗兔大泡性角膜病变[J];国际眼科杂志;2009年10期

7 孟志为;杨丽霞;胥亚男;;超声乳化白内障手术对年龄相关性白内障患者角膜内皮细胞的影响[J];国际眼科杂志;2010年05期

8 喻磊;李兴育;王从毅;;超声乳化术中灌注液迷流综合征表现及治疗方法的临床观察[J];国际眼科杂志;2011年03期

9 孙兴才;细胞外基质对角膜创伤修复的作用[J];国外医学.眼科学分册;1997年02期

10 李永华;张玉洁;聂冬丽;曹广华;;超声乳化术对抗青光眼术后白内障五方位角膜内皮的影响[J];国际眼科杂志;2013年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 刘小伟;兔角膜内皮细胞移植和自体骨髓间充质干细胞替代移植治疗角膜内皮损伤的初步研究[D];中国协和医科大学;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张超;组织工程角膜的体外构建及移植的实验研究[D];第四军医大学;2006年

，

本文编号：1157444