东北地区2型糖尿病患者Glis3基因多态性与糖尿病视网膜病变的关联性研究

发布时间：2017-11-09 14:03

  本文关键词：东北地区2型糖尿病患者Glis3基因多态性与糖尿病视网膜病变的关联性研究

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【摘要】：研究背景和目的 糖尿病（Diabetes Mellitus, DM）是影响全身各组织和脏器血糖代谢紊乱的疾病，其中糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy, DR）为糖尿病最严重的并发症之一，是糖尿病神经病变和微血管病变在眼底环境中的病理性改变。长期以来，糖尿病视网膜病变的发病机制被人们不断深入而广泛的研究着。目前研究认为，DR的发病机制中最重要的因素是高血糖连续不断的刺激及某些基因的突变和缺失，这些因素逐渐促使视网膜组织缺氧缺血、纤维增生、新生血管生成、血管通透性增加等，这些改变直接或间接的影响着DR的发展和发生。随着糖尿病患者的不断增加，DR的患者也逐年增加，因DR而致盲的患者也越来越多。临床中不难发现，在血糖控制方面，部分患者血糖未能得到良好的控制，DR便随即迅速发生发展。还有一部分血糖相对控制较好的患者，DR的发展也相对比较缓慢。由此看来，血糖的严格控制可以减轻和缓解一些DM患者DR的发展。然而某些血糖控制较好的DM患者会发生DR，某些血糖控制较差的DM患者却不发生DR，这又表明血糖的严格控制对DR的发生却是无法阻止的。在发病的先后顺序上，有些患者DM已经发生几年或者几十年，DR才相继发生，有些患者DM和DR几乎是同一时间发生的，还有一些DM患者甚至到死亡也未发生DR。曾有报道表明，DR具有显著家族聚集性及遗传倾向。由此可见不仅是高血糖严重影响着DR的发生发展，遗传因素在DR的发生发展中也起着不可逾越的作用,也更值得人们去探索和研究。DR是一个多基因作用的疾病，每个基因中都存在着多态性现象，而遗传异质性和种族差异性也是导致同基因多态性表达结果不同的原因。目前国内外学者从DR的病理生理方面和分子生物学角度去筛选可能影响DR发生发展的候选基因，并从基因表达调控和基因多态性方面分析DR的遗传易感性。Glis3(Gli-similar3)是GLI样锌指蛋白家族的成员之一，也被称作ZNF515（锌指蛋白515），编码核内蛋白。由于对该基因在胰腺、肾脏、肝脏、眼等重要器官中表达的研究深入，Glis3的结构、功能及临床意义越来越受到广大学者的关注。不少文献中又表明Glis3基因与糖尿病的联系非常紧密，此基因是目前研究发现的最新2型糖尿病的致病基因之一。那么该基因会和糖尿病视网膜病变有着怎样的联系，致病于糖尿病的Glis3基因是否也致病于糖尿病的严重并发症之一糖尿病视网膜病变，迄今为止还没有相关的研究报道。本研究旨在探讨东北地区2型糖尿病患者Glis3基因多态性与糖尿病视网膜病变（DR）的关联性，将糖尿病视网膜病变（DR）患者、糖尿病未合并视网膜病变（DNR）患者及正常自愿者（NC）进行分组对照。目前人们对DR基因方面进行越来越多的探索研究，如果能够详尽、准确的把握Glis3基因在DR发生发展过程中的作用机制，则有助于在典型的、临床可鉴别的症状出现之前对DR准确的作出判断和诊断，为DR的早期预防及治疗提供新的手段和方法，也为其个体化诊断和基因治疗开辟了新的途径。为探讨Glis3基因在不同疾病中的关联性，我们应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性检测技术（PCR-RFLP）对选择的两个位点：rs7041847和rs7034200进行多态性分析，借此了解Glis3基因表达的差异，此基因对相关性疾病的影响，为DR基因诊断及治疗提供新的依据。 方法 病例来源于自2011年01月-2012年03月来沈阳市第四人民医院眼科门诊及病房就诊的东北地区患者，符合1999年WHO糖尿病专家委员会提出的糖尿病诊断和分型标准，确诊病史≥7年并无严重心脑血管疾病的汉族2型糖尿病自愿者，及汉族正常自愿者。所有病例均接受糖尿病视网膜病变（DR）入组标准进行详细的病史采集，包括2型糖尿病病程、测量空腹血糖、吸烟史、饮酒史、高血压史、测量身高、体重并计算体重指数，以及视力、眼压、间接检眼镜、裂隙灯显微镜、荧光素眼底血管造影（FFA）等。FFA的阅片及诊断由指定的同一名眼底病专家一人独立完成。根据患者眼底及FFA检查结果将患者分为2型糖尿病（T2DM）合并视网膜病变的DR组50例，2型糖尿病未合并视网膜病变的DNR组50例，另外收集正常（NC）组50例。对所有受试者进行肘正中静脉外周血2ml采集，按照全血基因组DNA提取试剂盒（由康为世纪生物科技有限公司提供）操作流程提取基因组DNA，针对选定的两个位点分别设计特异性引物（由上海生工生物服务有限工程公司提供），并进行常规PCR，对PCR产物进行酶切。采用SPSS13.0版软件包(SPSS Company, Chicago, Illinois, USA)进行数据统计分析。 结果 1、患者的一般情况分析：DR、DNR及NC组患者间性别构成、年龄分布差异无统计学意义（p0.05），三组间可以进行统计学对比。DR及DNR间对比，FBG、BMI及高血压患病情况、吸烟史、饮酒史等差异无显著性，统计学无意义（p0.05）。DR组的糖尿病病程较DNR组长，差异有显著性，具有统计学意义(p0.05)。与NC组相对比，DR及DNR组的空腹血糖、体重指数、高血压患病情况、吸烟史、饮酒史均有显著差异，具有统计学意义(p0.05)。 2、所有纳入研究的样本，DNA均使用试剂盒成功提取，并经常规PCR得到产物，将产物进行酶切得到相关基因型。经Hardy-Weinberg检验分析基因型均符合遗传平衡法则，具有恒定性。 3、DR组Glis3基因rs7041847多态性位点的AA、AG、GG基因型频率分别是50%、36%、7%，DNR组的三种基因型频率分别是52%、30%、18%，NC组的频率分别是80%、16%、4%。DR与NC对比，差异具有显著性（χ2=10.09，，p0.01）；DNR与NC对比，差异具有显著性（χ2=9.55，p0.01）；DR与DNR对比，差异无显著性（χ2=0.54，p0.05）。 Glis3基因rs7041847多态性位点的等位基因频率相对比：DR与NC对比差异具有显著性（χ2=11.66，p0.01）；DNR与NC对比差异具有显著性（χ2=12.65，p0.01）；DR与DNR对比，差异无显著性（χ2=0.02，p0.05）。在DR及DNR组，G等位基因频率均高于NC组。 4、DR组Glis3基因rs7034200多态性位点的AA、AC、CC基因型频率分别是46%，30%，24%，DNR组的三种基因型频率分别是48%、28%、24%，NC组的频率分别是78%、14%、8%。DR与NC对比，差异具有显著性（χ2=11.04，p0.01）；DNR与NC对比，差异具有显著性（χ2=9.90，p0.01）；DR与DNR对比，差异无显著性（χ2=0.06，p0.05）。 Glis3基因rs7034200多态性的等位基因频率相对比：DR与NC对比，差异具有显著性（χ2=14.61，p0.01）；DNR与NC对比，差异具有显著性（χ2=13.58，p0.01）；DR与DNR对比，差异无显著性（χ2=0.02，p0.05）。在DR及DNR组，C等位基因频率均高于NC组。 5、经去除危险因素后，多因素非条件Logistic回归分析显示，rs7041847多态性AG+GG是DR及T2DM的危险因素（OR=2.976、95%CI=1.97-16.85；OR=2.976；95%CI=1.97-16.85）、rs7034200多态性AC+CC是DR及T2DM的危险因素（OR=1.249、95%CI=1.03-12.68；OR=1.854;95%CI=1.27-9.98）。但Glis3是否会诱发或加重DR的发生、发展及预后，本研究并未发现。 结论 1、血压、T2DM病程、FBG、BMI、吸烟史、饮酒史与DR及T2DM正相关，是DR及T2DM的危险因素。 2、Glis3基因rs7041847及rs7034200位点多态性与东北地区T2DM患病率有关，G及C等位基因是T2DM遗传高危因子。 3、Glis3是DR的高危因素之一，但并不代表Glis3是T2DM诱发、进展为DR的可能。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R587.2;R774.1

【参考文献】

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1 佐藤浩章 ,廖宏;糖尿病视网膜病的发病机制与治疗[J];日本医学介绍;2003年09期

本文编号：1162158