NLRP3蛋白在病毒性角膜炎中的表达性研究

发布时间：2017-11-12 09:02

  本文关键词：NLRP3蛋白在病毒性角膜炎中的表达性研究

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【摘要】：目的 病毒性角膜炎是一种由病毒致病原感染角膜而引起的致盲率极高的感染性疾病，其发病机理尚未明确。本研究主要选用固有免疫中NOD样模式识别受体分子中NLRP3蛋白，采用Balb/C小鼠角膜和人角膜上皮建立实验性病毒性角膜炎模型。通过检测角膜上皮细胞中病毒体对NLRP3蛋白表达的影响及作用，进而研究NLRP3蛋白在病毒性角膜炎发病中的相关作用。 方法 选用相同周龄雄性Balb/C小鼠，采用角膜基质注射法注射3×105/ml Ⅰ型带状疱疹病毒（HSV-1）1μl建立小鼠的病毒性角膜炎模型。在感染后第1天和第7天用Western blot和免疫荧光技术分别观察NLRP3蛋白的表达及定位情况。在临床上取正常人和HSV-1感染活动期病人的角膜环做冰冻切片，用免疫荧光技术检测人角膜上皮细胞中NLPR3位置变化情况。通过体外培养的SV-40大T抗原（猿猴空泡病毒大T抗原）转染的人角膜上皮细胞系（HCEC）模拟体外病毒性角膜炎发病模型，用同样的方法观察NLRP3蛋白在HCEC上的表达及变化情况。并在加入KCL抑制剂后，观察NLRP3蛋白的表达的表达情况。 结果 Balb/C小鼠在角膜基质注射3×105/ml HSV-1病毒后感染了严重的角膜炎。在感染7天时，小鼠角膜水肿、溃疡，有大量的角膜新生血管产生。Western blot结果显示小鼠角膜感染7天时，NLRP3蛋白被激活，组成一个分子较大的NLRP3炎症小体的复合体，并且有大量的IL-1β表达。免疫荧光结果显示，正常小鼠角膜上皮细胞中NLRP3蛋白主要在细胞质区域表达，在感染后第1天时，基本没有变化，但在感染后第7天时，有大量的NLRP3蛋白高表达在角膜上皮细胞的细胞核区域。在正常人和HSV-1感染活动期的人的角膜环上，免疫荧光实验显示同样的重定位现象。结果显示，在HSV-1病毒性角膜炎感染一定时期，HSV-1病毒可以激活NLRP3蛋白的活性，并且可以使NLRP3蛋白发生重定位现象。为了验证，在角膜上皮细胞系当中，病毒感染与NLRP3蛋白之间的作用并非偶然性。我们在SV-40大T抗原转染的人角膜上皮细胞（HCEC）当中，用Westernblot和免疫荧光技术检测了NLRP3的表达与位置定位情况。实验结果显示，在正常的人角膜上皮细胞中，NLRP3蛋白主要表达在细胞质区域，而在HCEC模拟病毒性角膜炎模型当中，，NLRP3蛋白几乎全部在细胞核区域表达，在细胞质区域几乎没有表达。KCL是在NLRP3炎症小体活化过程中的一种抑制剂，可以抑制NLRP3炎症小体的活化，当我们在HCEC当中加入相应浓度的KCL后，发现大部分的NLRP3蛋白部分表达在了细胞质区域。实验结果显示，SV-40大T抗原，在HCEC当中，与NLRP3蛋白发生了一定的作用，在激活NLRP3炎症小体的同时，使NLRP3蛋白发生从细胞质到细胞核的转移性表达。
【学位授予单位】：泰山医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R772.21

【共引文献】

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本文编号：1175207