二甲双胍对抗下咽癌Fadu细胞生长的作用及其对化疗药物敏感性影响的研究

发布时间：2017-11-13 19:23

  本文关键词：二甲双胍对抗下咽癌Fadu细胞生长的作用及其对化疗药物敏感性影响的研究

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【摘要】：目的：检测二甲双胍作用于下咽癌Fadu细胞后其增殖及周期情况的变化，初步研究P21是否参与二甲双胍所激活的AMPK信号分子相关通路，并探讨二甲双胍联合顺铂、5-氟尿嘧啶及紫杉醇对Fadu细胞增殖情况的影响，为糖尿病下咽癌患者的药物治疗提供新方案。 方法： 1体外培养下咽癌Fadu细胞，予不同浓度的二甲双胍（0、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L）分别作用24h、48h、72h，用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞技术检测细胞周期。 2分别以0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的二甲双胍作用于Fadu细胞株，免疫细胞化学检测细胞中AMPK、P21表达情况的变化。 3体外培养Fadu细胞，将5mmol/L的二甲双胍分别与不同浓度的三种化疗药物联用，其中顺铂浓度分别为0、0.1μg/ml、0.5μg/ml、2μg/ml、4μg/ml，5-氟尿嘧啶为0、4μg/ml、20μg/ml、100μg/ml、500μg/ml，紫杉醇0、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml，作用于Fadu细胞24h、48h、72h，MTT法检测细胞增殖情况的变化。 结果： 1二甲双胍作用于Fadu细胞后可抑制其增殖，并且呈浓度、时间依赖性。随机区组设计方差分析显示：浓度因素对细胞存活率有影响，（F=97.411，P0.01）；作用时间对细胞存活率有影响，（F=323.251，P0.01）。其中作用48小时二甲双胍对人下咽癌Fadu细胞的IC50为15.036mmol/L。流式技术检测细胞周期显示，二甲双胍作用可使Fadu细胞发生G1期阻滞，同样受药物浓度及作用时间的双重影响。（P0.01）。 2免疫细胞化学染色显示：二甲双胍干预组较对照组AMPK及P21表达均增高，其差异均有统计学意义(P0.05)。且AMPK蛋白表达水平与P21蛋白表达水平呈正相关(r=0.764, P0.05)。 3二甲双胍联合化疗药物与单独应用化疗药物干预Fadu细胞不同时间，MTT结果显示：（1）不同浓度顺铂联合5mmol/L二甲双胍作用不同时间后细胞增殖抑制率均较单独应用顺铂增高，，作用24小时、48小时、72小时行多因素方差分析显示联合用药及顺铂单独作用对细胞增殖的影响有差异，P值均小于0.01。计算48小时联合用药的CI值为0.43，认为在人下咽癌Fadu细胞中二甲双胍联合顺铂作用具有高度协同作用。（2）低浓度5-氟尿嘧啶（4μg/ml、20μg/ml）联合5mmol/L二甲双胍作用24小时、48小时较单用5-氟尿嘧啶细胞存活率稍有降低，至作用72小时反而增加；而高浓度5-氟尿嘧啶（500μg/ml）与二甲双胍联合应用时在24小时、48小时、72小时均较单独应用5-氟尿嘧啶细胞存活率增加。计算48小时CI值为1.15，认为在人下咽癌Fadu细胞中二甲双胍对5-氟尿嘧啶有拮抗作用。（3）除1000ng/ml紫杉醇联用二甲双胍作用72小时较单用化疗药物细胞存活率升高以外，其余各浓度组作用不同时间Fadu细胞存活率均降低。作用24小时、48小时、72小时各行多因素方差分析显示联合用药及紫杉醇单独作用对细胞增殖影响有差异，P值均小于0.01。计算48小时联合用药的CI值为0.37，认为在人下咽癌Fadu细胞中二甲双胍联合紫杉醇具有强协同作用。 结论： 1二甲双胍可以抑制人下咽癌Fadu细胞的增殖，这与二甲双胍导致细胞阻滞于G1期相关，并且二甲双胍至少部分通过AMPK及P21相关的信号分子发挥抗肿瘤作用。 2二甲双胍可以增强顺铂及紫杉醇的化疗敏感性，但是却拮抗5-氟尿嘧啶对Fadu细胞的毒性作用，提示我们在糖尿病合并下咽癌患者的药物治疗过程中，二甲双胍可以作为顺铂及紫杉醇的增敏剂使用，但却不宜与5-氟尿嘧啶联合应用。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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1 杨安强;郑兴征;潘晓琳;付锦艳;;细胞周期调控基因p21~(WAF1/CIP1)与肿瘤的关系[J];现代肿瘤医学;2006年02期

2 吴雄志;;运用新一代抗肿瘤药物分类系统指导中医学研究[J];中国中西医结合杂志;2009年09期

本文编号：1182066