敏感性分子开关检测高度近视ZNF644基因突变

发布时间：2017-11-15 10:18

  本文关键词：敏感性分子开关检测高度近视ZNF644基因突变

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【摘要】：目的：采用双硫代磷酸化修饰的特异性检测引物耦合Pfu高保真DNA聚合酶构成的突变敏感性分子开关，检测高度近视患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突变位点。 方法：根据ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）两个突变点在基因序列中的位置，构建野生型与突变型重组质粒作为研究模板。分别设计与野生型和突变基因位点配对的引物，采用双硫化磷酸修饰引物3′末端,耦合Pfu高保真DNA聚合酶构成的突变敏感性分子开关，对突变型及野生型质粒模板进行引物延伸反应，利用凝胶成像系统对其PCR产物进行分析。通过调节PCR反应过程中退火温度，优化PCR反应条件，，建立敏感性分子开关检测高度近视ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突变的方法，并将该方法用于筛查12位高度近视志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突变。 结果：当检测引物与模板完全匹配时，引物被延伸，有PCR产物，引物与模板不完全匹配时，引物不被延伸，则无PCR产物。在提高PCR反应退火温度条件下敏感性分子开关特异性提高，62℃退火温度下可特异性检测出质粒模板ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突变位点。使用该方法对12例临床高度近视志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突变的筛查未发现突变。 结论：突变敏感性分子开关可用于筛查高度近视患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突变。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R778.11

【参考文献】

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本文编号：1189383