STGC3基因核心启动子区转录调控元件的鉴定
本文关键词:STGC3基因核心启动子区转录调控元件的鉴定
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【摘要】:目的:应用生物信息学方法,预测STGC3基因核心启动子区潜在的转录因子结合位点;利用电泳迁移率变动分析和染色质免疫共沉淀技术,鉴定该基因核心启动子区的转录调控元件;运用RT-PCR和Western blot技术,检测转录因子Sp1在NPC细胞中的表达水平,揭示STGC3基因的转录调控分子机制。 方法:本研究在前期研究的工作基础上,运用生物信息学在线软件,预测STGC3基因核心启动子区(-934bp/-653bp)序列上可能存在的转录因子结合位点;根据预测结果,按照转录因子Sp1位点所在的DNA序列,分别制备三种探针:即生物素标记的野生型探针、生物素标记的突变型探针、未标记的野生型探针;提取CNE2细胞核蛋白,电泳迁移率变动分析(EMSA),体外鉴定Sp1转录因子结合位点;染色质免疫共沉淀分析(ChIP),体内鉴定Sp1转录因子结合位点;采用RT-PCR及Western blot技术,从mRNA及蛋白质水平,检测Sp1转录因子在不同细胞系中的表达。 结果:生物信息学在线软件预测,结果显示-934bp至-653bp区域共存在AP-1、Sp1、GAL4、HNF-3B和C/EBPalp等21个转录因子结合位点,其中9个Sp1转录因子结合位点;严格设定参数后,该区域区仅含有5个转录调控元件,其中2个Sp1转录因子结合位点;EMSA和ChIP实验结果均证实CNE2细胞核中存在与转录因子Sp1相结合的蛋白质,此种结合具有特异性;RT-PCR检测结果表明,CNE2细胞(STGC3基因高表达)较NP69细胞(STGC3基因低表达)Sp1在mRNA水平的表达明显增高,,差异显著具有统计学意义(p0.01);Western blot检测结果显示,CNE2细胞中Sp1在蛋白水平的表达明显高于与NP69细胞,差异具有统计学意义(p0.05)。 结论: 1. STGC3基因核心启动子区存在转录因子Sp1的特异性结合位点。 2.在CNE2细胞中,转录因子Sp1负性调控STGC3基因的表达。
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R739.63
【参考文献】
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1 Dora L.Kwong;;Tumor suppressor genes on frequently deleted chromosome 3p in nasopharyngeal carcinoma[J];癌症;2012年05期
2 Marlinda Adham;Antonius N.Kurniawan;Arina Ika Muhtadi;Averdi Roezin;Bambang Hermani;Soehartati Gondhowiardjo;I Bing Tan;Jaap M.Middeldorp;;Nasopharyngeal carcinoma in Indonesia:epidemiology,incidence,signs,and symptoms at presentation[J];癌症;2012年04期
3 邓敏;贺修胜;罗桥;赵帅;曾超;李艳兰;;Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究[J];生物化学与生物物理进展;2006年01期
4 胡波;邱青朝;贺修胜;罗桥;唐国华;龙治峰;廖银花;;雌激素对转STGC3基因CNE2细胞系生长增殖的影响[J];生物化学与生物物理进展;2007年05期
5 苟雅萍;孙崇奎;胡玲;何金枝;张朝良;冯云;张平;孔祥丽;肖丽英;李燕;;鼻咽癌组织中DNA损伤与EB病毒感染的相关性研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2014年02期
本文编号:1219272
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