STGC3基因核心启动子区转录调控元件的鉴定

发布时间：2017-11-23 17:29

  本文关键词：STGC3基因核心启动子区转录调控元件的鉴定

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【摘要】：目的：应用生物信息学方法，预测STGC3基因核心启动子区潜在的转录因子结合位点；利用电泳迁移率变动分析和染色质免疫共沉淀技术，鉴定该基因核心启动子区的转录调控元件；运用RT-PCR和Western blot技术，检测转录因子Sp1在NPC细胞中的表达水平，揭示STGC3基因的转录调控分子机制。 方法：本研究在前期研究的工作基础上，运用生物信息学在线软件，预测STGC3基因核心启动子区(-934bp/-653bp)序列上可能存在的转录因子结合位点；根据预测结果，按照转录因子Sp1位点所在的DNA序列，分别制备三种探针：即生物素标记的野生型探针、生物素标记的突变型探针、未标记的野生型探针；提取CNE2细胞核蛋白，电泳迁移率变动分析(EMSA)，体外鉴定Sp1转录因子结合位点；染色质免疫共沉淀分析(ChIP)，体内鉴定Sp1转录因子结合位点；采用RT-PCR及Western blot技术，从mRNA及蛋白质水平，检测Sp1转录因子在不同细胞系中的表达。 结果：生物信息学在线软件预测，结果显示-934bp至-653bp区域共存在AP-1、Sp1、GAL4、HNF-3B和C/EBPalp等21个转录因子结合位点，其中9个Sp1转录因子结合位点；严格设定参数后，该区域区仅含有5个转录调控元件，其中2个Sp1转录因子结合位点；EMSA和ChIP实验结果均证实CNE2细胞核中存在与转录因子Sp1相结合的蛋白质，此种结合具有特异性；RT-PCR检测结果表明，CNE2细胞(STGC3基因高表达)较NP69细胞(STGC3基因低表达)Sp1在mRNA水平的表达明显增高，，差异显著具有统计学意义(p0.01)；Western blot检测结果显示，CNE2细胞中Sp1在蛋白水平的表达明显高于与NP69细胞，差异具有统计学意义(p0.05)。 结论： 1. STGC3基因核心启动子区存在转录因子Sp1的特异性结合位点。 2.在CNE2细胞中，转录因子Sp1负性调控STGC3基因的表达。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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本文编号：1219272