bFGF对人晶状体上皮细胞氯通道蛋白ClC-3表达的影响及其相关机制研究

发布时间：2017-12-02 23:04

  本文关键词：bFGF对人晶状体上皮细胞氯通道蛋白ClC-3表达的影响及其相关机制研究

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【摘要】：目的： 1、观察碱性成纤维生长因子（bFGF）对人晶状体上皮细胞（LECs）氯通道蛋白ClC-3的影响。 2、探讨MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信号传导通路在bFGF调节晶状体上皮细胞ClC-3表达中的作用机制。 方法： 1、以体外培养的人晶状体上皮细胞株HLE-B3为研究对象，常规培养的细胞作为空白对照组（control组），加入不同浓度（1,10,100ug/L）的bFGF进行处理，RT-PCR法测定不同浓度及作用时间下LECs中ClC-3转录水平的表达变化。 2、免疫荧光及Western Blot法定位及半定量检测不同浓度（1,10,100ug/L）的bFGF对人LECs ClC-3蛋白表达的影响。 3、 Western Blot法检测不同浓度（1,10,100ug/L）的bFGF处理人晶状体上皮细胞后，ERK1/2、AKT磷酸化水平的变化情况。 4、 Western Blot检测细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2)信号通路抑制剂PD98059和三磷酸肌醇激酶（PI3K/Akt）信号通路抑制剂LY294002作用于bFGF诱导的LECs增殖过程中ClC-3蛋白的表达变化。 结果： 1、RT-PCR结果示：Control组表达少量ClC-3mRNA，不同浓度bFGF处理人LECs后，1、10ug/L bFGF处理组ClC-3mRNA的表达明显增强，与control组比较差异有统计学意义（P＜0.01），其中10ug/L作用6h表达量最大。随着浓度增加至100ug/L，ClC-3mRNA的表达则下降，与control组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 2、Western Blot检测示bFGF处理组中ClC-3蛋白表达随bFGF浓度的增大而增加，在10ug/L时表达量达到峰值，继续增加浓度至100ug/L，其表达则下降。10ug/L bFGF组与其余各组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。免疫荧光示ClC-3蛋白表达于人LECs的整个细胞中，且主要聚集在细胞核及其周围。 3、不同浓度(1,10,100ug/L)bFGF处理人LECs6h后，Western Blot检测示P-ERK1/2蛋白表达随bFGF浓度的增大而增加，呈浓度依赖性。P-AKT蛋白随bFGF浓度的增大而增加，在10ug/L时表达量达到峰值，继续增加浓度表达则下降,10ug/L bFGF组与其余各组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。非磷酸化ERK1/2、AKT变化不大。 4、信号通路抑制剂LY294002、PD98059与bFGF共同孵育人LECs后，显示LY294002+bFGF联合组、PD98059+bFGF联合组较单用bFGF组ClC-3蛋白的表达明显降低，两者比较差异有显著性统计学意义（P＜0.01），，而单用LY294002、PD98059组与conrtol组相比ClC-3蛋白的表达相近，差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论： 1、bFGF促进人LECs增殖，1-10ug/L的bFGF能诱导ClC-3的表达，提示ClC-3与人晶状体上皮细胞增殖过程密切相关。 2、MAPK/ERK1/2、PI3K/Akt信号通路均介导bFGF诱导的人LECs ClC-3表达的调控过程。其中，PI3K/Akt信号通路可能发挥主要作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R776


本文编号：1246558