TPRN基因突变检测分析及其质粒表达载体的构建

发布时间：2017-12-03 14:19

  本文关键词：TPRN基因突变检测分析及其质粒表达载体的构建

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【摘要】：摘要：耳聋是造成人类残疾最常见的原因,我国现有听力言语残疾者达2780万人,居各类残疾的首位。目前全世界每1000个新生儿中就有一个先天性的聋儿,我国每年约有3万聋儿出生,其中60%为遗传性聋。在遗传性聋中,非综合征性聋约占70%,综合征性聋占30%。最常见的类型为常染色体隐性遗传性非综合征性聋,占非综合征性聋的比例约77%。目前已发现常染色体隐性遗传性非综合征性聋位点73个,相关基因40个。 TPRN基因是2010年发现的一个主要表达在毛细胞静纤毛Taper区域的常染色体隐性遗传性耳聋79型(DFNB79)的致病基因,其表达产物为Taperin蛋白。 为了解TPRN基因突变在中国人非综合征性聋人群中的分布情况和研究Taperin蛋白在听觉产生中的作用。本实验一方面采用耳聋基因芯片检测法和DNA直接测序法对耳聋患者进行TPRN基因突变的检测分析；另一方面构建TPRN shRNA质粒表达载体为下一步的TPRN基因体外抑制实验做准备。 一.TPRN基因在中国非综合征型耳聋患者中的检测 目的：研究TPRN基因在中国人非综合征性聋患者中的突变发生的概率、突变形式。 方法：采用耳聋基因芯片对81名非综合征性聋患者进行耳聋基因检测,排除了常见的4个致病基因的9个位点后,采用DNA直接测序法对这81例耳聋患者和52例健康对照成员进行TPRN基因的检测。 结果：81名耳聋患者中未发现已报道的TPRN基因突变；2名患者在1号外显子处发现携带有相同的TPRN基因杂合子突变559GT,导致编码的氨基酸由丙氨酸变为丝氨酸(A187S),对照组中未发现相同突变。另外在患者和正常人中发现1号外显子处2个同义突变157CT和318CT。经氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守区域内,而且在对照组未发现该突变,此突变可能与耳聋有关。 结论目前发现TPRN基因突变在中国人非综合征型耳聋患者中整体发生频率较低,其功能有待进一步研究。 二.TPRN siRNA质粒表达载体的构建和鉴定 目的：构建TPRN siRNA质粒表达载体,为进一步的RNA干扰实验做准备。 方法：设计并合成2组针对靶基因编码区的siRNA和1组阴性对照的siRNA,分别连接到pGenesil-2质粒载体上,并用PCR和酶切法对重组质粒进行鉴定。 结果：重组质粒中已插入了目的基因片段。 结论：成功的构建了和鉴定了TPRN siRNA质粒表达载体pGenesil-2-tprn-siRNA。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R764.43

【参考文献】

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1 夏家辉;人类遗传病的家系收集疾病基因定位克隆与疾病基因功能的研究[J];中国工程科学;2000年11期

2 江凌晓;凌月仙;蔡桂君;王瑞莲;;遗传性耳聋基因芯片检测的临床应用研究[J];分子诊断与治疗杂志;2011年03期

3 韩东一;;中国聋病防治现状[J];中华耳科学杂志;2007年04期

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本文编号：1248915