玻璃体腔注射重组腺相关病毒—人NADH脱氢酶4亚基的实验研究

发布时间：2017-12-06 16:22

  本文关键词：玻璃体腔注射重组腺相关病毒—人NADH脱氢酶4亚基的实验研究

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【摘要】：目的：探索玻璃体腔注射腺相关病毒（AAV）介导基因人NADH脱氢酶4亚基（ND4）的剂量；评估重组腺相关病毒介导的人NADH脱氢酶4亚基（rAAV-ND4）在兔眼中表达的有效性和安全性。 方法：将融合了线粒体定位序列（Mitochondrial Targeting Sequence,MTS）的人ND4的开放阅读框整合到腺相关病毒（AAV）的衣核中；构建载体AAV-ND4；将兔子分成三个处理组。并通过玻璃体腔注射的方法分别将0.1ml的AAV-ND4、0.1ml的AAV-GFP和0.1ml的PBS注射入兔眼中；通过结膜、角膜、晶状体、视网膜、眼压、闪光视觉诱发电位（Flash-visual evoked potential,F-VEP）、光学相干断层成像（OpticalCoherence Tomography,OCT）对注射AAV-ND4基因的兔眼进行安全性评估；通过实时定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative Polymerase Chain Reaction，，RT-PCR)、视网膜铺片、免疫荧光、westernblot从mRNA和蛋白水平上对兔眼视网膜中ND4基因表达的检测进行有效性评估。 结果：在三个处理组进行玻璃体腔注射后，没有任何一只发生不良反应；玻璃体腔注射一个月后，三个处理组的视网膜神经纤维层的平均厚度没有明显差别；视觉诱发电位测试结果显示三个处理组的P100波的潜伏期没有明显差别；实时定量PCR、视网膜铺片、免疫荧光和westernblot显示ND4和绿色荧光蛋白可以在视神经纤维层表达。 结论：说明玻璃体腔注射腺相关病毒-人ND4基因是一个安全有效地操作；对玻璃体腔注射剂量和这种注射方式的探索对我们以后临床上通过玻璃体腔注射腺相关病毒-人ND4基因治疗Leber遗传性视神经病变提供一个很好的参考。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.6

【参考文献】

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1 周晖晖;戴显宁;林蓓;米慧;刘晓玲;赵福新;张娟娟;周翔天;孙艳红;韦企平;瞿佳;管敏鑫;;7例携带线粒体tRNA~(Ala)C5601T突变的Leber遗传性视神经病变家系的相关研究[J];遗传;2012年08期

本文编号：1259217