光动力疗法对鼻咽癌细胞抑制作用的体外研究

发布时间：2017-12-13 10:12

  本文关键词：光动力疗法对鼻咽癌细胞抑制作用的体外研究

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【摘要】：鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinomas,NPC)多发于我国两广，湖南等地区，是高发的恶性肿瘤之一，发病率可高达30/10万。由于肿瘤生长部位比较隐蔽，难以发现，症状也不典型，因此在患者就医时已为中晚期。在目前广泛采用的放、化疗为主的治疗方法能使肿瘤患者的5年生存率达到70%左右，但是放化疗的并发症也同时严重影响着患者的生存率和生活质量。因此，寻找一种新的治疗方法来改善并提高患者的生存和生活质量成为迫切需要。光动力疗法（photodynamic therapy,PDT)选择性好，毒性低，起效快的特点越来越受到人们的重视，在临床工作中也取得了一些成效和进展。本研究选取5-氨基酮戊酸（5-ALA）作为光敏剂，采用低强度氦氖激光照射人鼻咽癌细胞CNE2，，检测5-ALA为光敏剂的光动力疗法（5-ALA-PDT）对体外培养的人鼻咽癌细胞的损伤作用和作用方式。本研究的目的在于探讨PDT对体外鼻咽癌细胞的影响，并为临床治疗提供理论依据。 第一部分5-ALA-PDT对体外人鼻咽癌细胞的作用 目的：研究5-ALA-PDT对体外培养的人鼻咽癌细胞有无抑制作用，以及5-ALA对细胞的暗毒性等。 方法： 1、细胞分组对照组（无5-ALA无血清孵育、无光照），单纯激光照射组（无5-ALA无血清孵育、光照），单纯光敏剂孵育组（5-ALA无血清孵育、无光照），实验组1（5-ALA孵育无血清、光照）,实验组2（5-ALA孵育加血清、光照）。 2、光镜下观察经5-ALA-PDT后细胞形态学变化将各组细胞进行倒置相差显微镜下观察细胞形态改变。 3、MTT细胞毒实验检测5-ALA对细胞的暗毒性、低强度激光单纯辐照对细胞的影响、不同照射时间对细胞的影响、血清对5-ALA-PDT的影响以及5-ALA在细胞内最大饱和度。 结果： 1、5-ALA-PDT后细胞形态学变化经过PDT后即刻显微镜下观察实验组细胞变小，变圆，折光性变弱，光照6小时后细胞贴壁能力下降，细胞间隙增宽，核膜着色加深，核固缩。 2、MTT法检测细胞活力5-ALA-PDT对CNE2的抑制作用在照光时间上有依赖关系，照光时间越长，抑制率越高；在5-ALA浓度上也有依赖关系，但是超过2.0mmol/L时，抑制率变化不明显。单纯激光照射对肿瘤细胞没有杀伤作用。单纯药物组，即5-ALA孵育组，对细胞也无明显影响。实验组2，即加血清组，与对照组比较无明显区别。 结论： 1、PDT对肿瘤细胞起到了杀伤作用；光敏剂必须和光照结合在一起才能取得疗效；血清对PDT的治疗效果干扰作用很大，可以降低或者对抗光疗的效果。 2、光敏剂在细胞内有一个饱和度，饱和浓度为2mmol/L，细胞抑制率的大小对光照剂量的大小有依赖性；低强度氦氖激光照射对体外培养的细胞无损伤作用；光敏剂孵育对细胞没有暗毒性；血清对5-ALA-PDT有明显的抑制作用。 第二部分`探讨5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞抑制作用的途径及对人端粒酶催化亚基（hTERT）、caspase9的影响 目的：检测经过5-ALA-PDT后鼻咽癌细胞相关基因的表达量及鼻咽癌细胞受损伤的方式 方法： 1、细胞分组对照组,实验组（15s、30s、60s、120s、300s）； 2、荧光定量RT-PCR法检测人端粒酶催化亚基（hTERT），caspase9的mRNA表达； 3、Hoechst33258细胞核DNA染色分析 结果： 1．在mRNA检测水平上各组Caspase9均高于对照组；hTERT低于对照组的表达； 2．Hoechst33258细胞核DNA染色分析实验组细胞核或者细胞质内出现浓染致密的明亮蓝色颗粒块荧光，而其他各组细胞呈现弥散均匀的荧光，说明实验组细胞出现凋亡现象比较明显。 结论： 1.实时荧光定量结果提示5-ALA-PDT有效抑制了肿瘤细胞的生长，并且降低了细胞中端粒酶催化亚基hTERT的表达量，提示低强度激光照射对肿瘤细胞中的端粒酶活性有一定的抑制作用； 2.Hoechst33258细胞核DNA染色分析提示5-ALA-PDT抑制细胞的作用主要是通过诱导细胞凋亡的方式实现的。关键词：实时荧光定量，Caspase9，hTERT，Hoechst33258
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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本文编号：1284752