αA晶体蛋白基因启动子与HSP70基因融合表达载体构建及其在半乳糖诱导大鼠晶状体组织的表达

发布时间：2017-12-18 21:35

本文关键词：αA晶体蛋白基因启动子与HSP70基因融合表达载体构建及其在半乳糖诱导大鼠晶状体组织的表达

【摘要】：目的：构建aA晶体蛋白基因启动子(aACP)与HSP70基因融合表达载体paACP-HSP70,并检测其在半乳糖诱导的大鼠晶状体组织的表达及其对半乳糖诱导大鼠晶状体组织抗氧化系统的作用。方法：利用PCR技术从pIRES2-EGFP-HSP70中扩增HSP70,用Xho I和BamH I分别酶切扩增产物和paACP-IRES2-EGFP载体,回收目的片段再连接构建aACP启动子启动的含HSP70基因的特异性表达载体paACP-HSP70,通过酶切、PCR检测及测序证实其构建成功。利用脂质体转染法将质粒pIRES2-EGFP、 pIRES2-EGFP-HSP70、paACP-HSP70分别导入半乳糖诱导的大鼠晶状体组织,以生理盐水作为空白对照。通过荧光显微镜直接观察绿色荧光蛋白基因(EGFP)的表达,western blot检测HSP70基因在大鼠晶状体组织中的表达；用SOD试剂盒及GSH-Px试剂盒分别检测晶状体抗氧化系统中SOD、GSH-Px活性的变化。结果：(1)构建的paACP-HSP70质粒通过酶切图谱鉴定、PCR检测有1924bp条带出现,通过测序显示所克隆的HSP70基因与基因库中的同种序列比较,核苷酸序列有100%的同源性。(2)pIRES2-EGFP组、pHSP70组、paACP-HSP70组在大鼠晶状体组织均可直接观察到绿色荧光,且paACP-HSP70组荧光强度最强,与pIRES2-EGFP组、pHSP70组的差异均有显著性(P0.01),NS组未见荧光蛋白表达。(3) western blot检测显示外源性HSP70基因可在大鼠晶状体组织表达。(4)在高糖刺激下晶状体中SOD及GSH-Px活力明显下降,paACP-HSP70组与其他组相比SOD、GSH-Px的活性显著升高(P0.01),与NS组比较分别增加了1.41倍和13.65倍。结论：成功构建了晶状体上皮细胞特异性表达载体paACP-HSP70;该表达载体导入大鼠晶状体组织内可表达外源性HSP70基因；外源性HSP70能改善高糖诱导的白内障的晶状体的抗氧化系统活力。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R776.1

【参考文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 饶惠英,姚克;热休克蛋白在眼晶状体的表达与热耐受[J];国外医学(眼科学分册);2004年03期

2 李莹;王玉清;曹丽辉;冯澜;;热休克蛋白70在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义[J];黑龙江医药科学;2006年04期

3 孙丽霞;赵桂秋;李宏武;张淑芝;;手机微波急性辐照对hLECs内aB-crystallin、Hsp70表达及细胞增殖活性的影响[J];山东医药;2009年30期

4 黄玉;杨波;迟小华;刘丽宏;李薇;卢学春;;真核生物启动子的研究及应用[J];生物技术通讯;2010年02期

5 严汉英;抗白内障新药苄达赖氨酸的研究进展[J];中国新药与临床杂志;1999年04期

6 周浩;褚仁远;周行涛;卢奕;戴锦晖;;晶状体囊膜HSP 70的表达与年龄相关性白内障[J];眼科研究;2007年01期

7 刘莲;钟敬祥;张广斌;汪炬;高思红;;HSP70在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义[J];眼科研究;2007年11期

8 李琪;严宏;;α-晶状体蛋白在眼科疾病中的作用研究进展[J];眼科研究;2010年11期

9 张士元;我国白内障的流行病学调查资料分析[J];中华眼科杂志;1999年05期

10 周毅;屠冠军;;基质金属蛋白酶组织抑制剂1基因重组腺病毒载体的构建[J];中国医科大学学报;2012年09期