AIF基因的能量代谢功能分析

发布时间：2017-12-18 23:10

  本文关键词：AIF基因的能量代谢功能分析

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【摘要】：目的量化AIF基因在细胞能量代谢中的功能特性,探讨该基因相关听神经病的分子致病机制。方法选择第三代基因编辑工具CRISPR-Cas9技术结合阳离子脂质体转染技术,快速实现对HELA细胞的AIF基因进行敲除,并通过Western blot进行蛋白表达分析,Sanger测序进行基因型的分析,然后利用Oxygraph-2K对多个AIF基因敲除细胞系以及野生型细胞系进行氧化供能的检测,最后采用Graph Pad prism5.00进行数据分析。结果通过该方法获得了多株AIF基因敲除细胞系,并发现野生型细胞系耗氧功能明显强于AIF基因敲除细胞系。结论通过CRISPR-Cas9技术的应用,本研究快速实现了AIF蛋白表达缺失细胞系和野生型细胞系在氧化呼吸方面的差异比较,间接量化了该基因缺失所导致的能量损失,能量供应障碍可能是听神经病的致病机制之一。
【作者单位】： 解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所;
【基金】：国家重大科学研究计划项目(2014CB943001) 国家自然基金重大国际合作项目(81120108009) 全军“十二五”重点项目(BWS11J026)联合资助
【分类号】：R764
【正文快照】： 1980年,Worthington等报道了几例表型罕见的听力障碍病例,患者的ABR波形或阈值与其纯音结果不符[1]。随后,Krause等也报道了7例听力正常或中度损失,且无脑干损伤的患者,ABR的波形却出现了Ⅲ波或V波缺失的病例[2]。1992年,顾瑞教授报道了十余例双侧感音神经性听力减退损失的病

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本文编号：1305967