小鼠体外视网膜神经节细胞中PirB的表达及其对轴突生长的作用研究

发布时间：2017-12-22 18:18

  本文关键词：小鼠体外视网膜神经节细胞中PirB的表达及其对轴突生长的作用研究　出处：《第三军医大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：哺乳动物成体中枢神经损伤后再生的可能性很低,当前医学关注的重点集中在如何促进其再生。以往一系列的实验研究表明,成年人的中枢神经轴突损伤后再生十分困难,这主要是与神经损伤周围的微环境有关。中枢微环境中有许多不利于轴突再生的因素,包括神经抑制因子、炎症的发生和神经营养因子的缺乏,其中神经抑制因子是最重要的影响因素。髓鞘相关抑制因子是诸多神经抑制因子的代表,主要包括髓鞘相关蛋白(Nogo-A,MAG和Omgp等)以及这些蛋白的受体/共受体(NgR1,p75,TROY,PirB和Lingo-1等)。这几种主要神经抑制因子(Nogo-A,MAG和Omgp)以NgR为其共同作用受体,MAIs-NgR通路的探索为成体动物神经损伤后的再生指明了新的方向。但是,一系列的研究发现,将NgR阻断后,中枢神经元轴突的再生能力没有明显改善。据2008年《Science》文章报道,这几种主要神经抑制因子还存在另一共同受体PirB,它能够阻抑中枢神经元轴突生长,且它阻抑轴突生长的作用比NgR更强。PirB的发现源于一项针对于免疫系统的研究,它被发现与人类自身IgA的FC受体非常相似,在很多各个种类的造血系细胞中均有PirB的出现,PirB蛋白的重要功能是可以维持免疫系统功能的稳定,保护正常细胞组织免受免疫细胞攻击和损伤。Josh Syken等学者进一步发现了PirB蛋白在中枢神经系统中有表达。本课题着重进行以下三方面的探讨:1.确定PirB在视网膜神经节细胞中的表达;2.探讨PirB蛋白在体外培养的C57BL/6小鼠的视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达及变化;3.验证PirB调控体外RGCs生长的机制。目的:以PirB受体为主要的研究对象,研究它在小鼠RGCs轴突生长中的生理作用。方法:论文以C57BL/6小鼠原代分离的视网膜神经节细胞为模型,采用免疫组织化学荧光的实验技术方法确定PirB在视网膜神经节细胞上的表达;荧光定量PCR和免疫印迹技术分别检测在视网膜神经节细胞诱导分化过程中,PirB和NgR的mRNA和蛋白表达水平;采用慢病毒转染等方法研究了敲低PirB以及NgR对体外培养的C57BL/6小鼠RGCs轴突生长中的作用;通过显微镜观察拍照,记录统计不同处理条件下,小鼠RGCs轴突生长的长度。本文重点关注PirB在RGCs中的表达情况以及阻断PirB对RGCs轴突生长的作用,并探讨PirB与NgR可能的协同作用,主要结果和结论如下:1.PirB在体外培养的原代视网膜神经节细胞中表达,其表达水平变化随着视网膜神经节细胞的培养时间呈现一定规律;2.使用慢病毒转染敲低PirB或NgR后发现,PirB敲低对视网膜神经节细胞轴突的生长有一定的改善作用,但同时阻断NgR并不会增益这一效果,而单独阻断NgR不会显著改善轴突生长。此外,联用CNTF后,阻断了PirB的RGCs轴突生长得到进一步改善。本研究有助于深入对视神经损伤再生机制的理解,提供新的视神经损伤治疗靶点,为成体视神经损伤治疗提供新的思路。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.1

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本文编号：1320520