鼻咽癌组织中磷酸果糖激酶1的表达及RNA干扰靶向沉默磷酸果糖激酶1对鼻咽癌细胞株CNE2生物学特性的影响

发布时间：2018-02-03 06:16

  本文关键词： 磷酸果糖激酶1 鼻咽癌 糖酵解途径 淋巴结转移 鼻咽癌 糖酵解 磷酸果糖激酶1 RNA干扰　出处：《华中科技大学》2014年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分鼻咽癌组织中磷酸果糖激酶1的表达及其酶活性检测 目的：检测鼻咽部正常组织、癌组织中糖酵解途径关键限速酶-磷酸果糖激酶1(phosphofructokinasel, PFK1)的mRNA和蛋白表达水平及其酶活性,分析磷酸果糖激酶1与鼻咽癌生物学特性的关系。 方法：采用病例-对照设计的方法,鼻咽癌组织活检标本来自41位鼻咽癌的患者,对照组活检标本来自20位鼻咽部慢性炎症的患者鼻咽部组织,采取实时定量PCR(RT-PCR)检查PFK1mRNA的表达水平,采取免疫印迹法(Western-blot)检测PFK1蛋白的表达；酶学分析的方法检测PFK1酶活性。 结果：在鼻咽部的活检标本中,①鼻咽癌组中的PFK1mRNA表达水平、蛋白表达水平及其酶活性均明显高于鼻咽部慢性炎性组,差异有统计学意义(P0.01),②在伴有淋巴结转移的鼻咽癌组中PFK1mRNA表达水平、蛋白表达水平及其酶活性均明显高于无伴淋巴结转移的鼻咽癌组,差异有统计学意义(P0.01)。 结论：PFK1与鼻咽癌的发生、发展密切相关,可能作为鼻咽癌的分子标志物之一,特异性抑制PFK1有可能成为治疗鼻咽癌的新策略。 第二部分RNA干扰靶向沉默磷酸果糖激酶1的表达对鼻咽癌细胞株CNE2生物学特性的影响 目的：恶性肿瘤细胞糖酵解途径增强,而磷酸果糖激1(phosphofructokinasel,PFK1)是糖酵解途径的关键酶,本研究通过构建shRNA-PFK1质粒,转染鼻咽癌CNE2细胞,分析鼻咽癌细胞生物学特性的变化。 方法：构建4条shRNA-PFK1质粒,转染质粒至鼻咽癌CNE2细胞中,采用实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR, RT-PCR)检测不同质粒转染后PFK1mRNA的表达变化,将抑制效率最高的shRNA-PFK1质粒转染CNE2细胞,RT-PCR检测转染前后PFK1mRNA表达的变化,免疫印迹法(Western-blot)检测PFK1蛋白表达的变化,酶学分析的方法检测PFK1酶活性的变化, MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡变化,细胞划痕试验检测转染后细胞体外迁移能力的变化,Transwell细胞侵袭试验检测转染后细胞体外侵袭能力的变化。 结果：4条shRNA-PFK1质粒转染鼻咽癌CNE2细胞后,质粒sh-H-PFK1-507的2-ΔΔCT值较其余3条质粒及空白对照组、质粒对照组小,差异有统计学意义(P0.01),有抑制作用,且抑制效率最高。实验组CNE2细胞在稳定转染质粒sh-H-PFK1-507后PFK1mRNA表达量与空白对照组、质粒对照组相比显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),PFK1蛋白表达量与其他两组相比显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),PFK1酶活性与其他两组相比显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组在24h、36h、48h、72h的吸光度值明显低于其他两组,差异具有统计学意义(P0.05),实验组细胞增殖能力收到抑制。实验组与空白对照组、质粒对照组相比凋亡比例明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。实验组细胞体外迁移能力明显低于空白对照组与质粒对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。实验组细胞体外侵袭能力明显低于空白对照组与质粒对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。 结论：shRNA-PFK1通过抑制鼻咽癌细胞PFK1的表达,进而抑制鼻咽癌细胞增殖能力、体外迁移能力和侵袭能力并促进细胞凋亡,可能成为治疗鼻咽癌的新策略。
[Abstract]:Expression of phosphofructokinase 1 and its enzyme activity in the first part of nasopharyngeal carcinoma Objective : To detect the mRNA and protein expression level of phosphofructokinase 1 ( PFK1 ) and its enzyme activity in normal tissues and cancerous tissues of nasopharyngeal carcinoma , and to analyze the relationship between phosphofructokinase 1 and biological characteristics of nasopharyngeal carcinoma . Methods : A case - control method was used to study the expression of PFK1 mRNA in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) from 41 patients with nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) and control group . The expression level of PFK1mRNA was examined by real - time quantitative PCR ( RT - PCR ) . Western - blot was used to detect PFK1 protein expression . Results : 鈶，

本文编号：1486664