小鼠神经营养性角膜炎的初步研究

发布时间：2018-02-27 16:48

  本文关键词： 三叉神经 动物模型 神经营养性角膜炎 角膜神经 共焦显微镜　出处：《郑州大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 建立小鼠三叉神经损伤的动物模型,模拟神经营养性角膜炎的发病过程和转归；观察去三叉神经小鼠角膜的临床改变和修复过程；探讨去神经支配对小鼠角膜神经密度、角膜上皮完整性和功能的影响。 材料与方法 选取成年雄性C57BL/6小鼠70只,按随机数字表分为正常对照组、Id、3d、1w、2w、3w、4w,共7组,每组各10只小鼠。选取左侧为实验侧,无水乙醇法去除小鼠左侧三叉神经第一支眼神经。分别对正常对照组和不同时间点的实验组进行泪液分泌实验检查、角膜荧光素染色检查和活体共焦显微镜检查,采集照片并记录结果。然后,过量戊巴比妥钠腹腔注射处死小鼠,分别取小鼠左侧角膜和颅内三叉神经眼支。小鼠角膜神经采用Tubulinβ-Ⅲ抗体标记,离体共聚焦显微镜观察,拍摄并保存图片；三叉神经采用丽春红—亮绿法染色,免疫荧光显微镜下观察,拍摄并保存图片。对所得的结果和图片进行统计和分析。 结果 1.小鼠角膜荧光素染色并裂隙灯显微镜下钴蓝光观察显示,损毁三叉神经后小鼠角膜起初呈现浅层点状荧光素着色,随着病程的发展,荧光素着色灶逐渐融合,范围扩大,于1周时荧光素渗透性达顶峰,而后呈现出缓慢的恢复迹象。 2.损伤小鼠三叉神经后,小鼠的泪液分泌量迅速减少,在2周时降为最低值,而后呈现出缓慢的恢复过程。 3.活体共焦显微镜观察可见,损伤三叉神经后,小鼠角膜上皮细胞体积增大,多形性明显增加；前弹力层神经纤维分布稀疏或不可见；角膜基质结构被破坏,可见其中分布大量胞体较小的高反光的细胞形物；后弹力层可以观察到明显的细胞皱褶结构。 4.小鼠角膜神经Tubulinβ-Ⅲ抗体染色显示,损伤小鼠三叉神经后,中央部角膜神经密度最敏感,显著下降；旁中央及周边部角膜神经也有明显缺失,但不如中央部位表现显著；病程后期未见观察到明显的神经纤维的修复及再生现象。 5.三叉神经冰冻切片病理染色的观察显示,损毁小鼠三叉神经后,无论是横切面还是纵切面观察,神经髓鞘的密度均随着病程的进展不同程度下降,神经髓鞘的形态也发生显著性改变。 结论 1.三叉神经损伤后,小鼠角膜基底下神经纤维丛密度显著下降,泪膜完整性和功能受到破坏,角膜荧光素渗透性增加；小鼠角膜呈现神经营养性角膜炎的改变。 2.随着病程的进展,小鼠角膜的泪膜完整性及荧光素渗透性均呈现出缓慢的恢复过程,而小鼠角膜基底下神经纤维丛密度没有观察到明显的增加,其可能的原因是脑源性的神经营养因子和神经生长因子分泌增加,小鼠的角膜上皮修复较快而神经纤维修复和再生周期较长。
[Abstract]:Purpose. To establish an animal model of trigeminal nerve injury in mice, to simulate the pathogenesis and outcome of neurotrophic keratitis; to observe the clinical changes and repair process of cornea in mice with trigeminal nerve removal; to explore the density of cornea nerve in mice with denervated innervation. The effect of corneal epithelial integrity and function. Materials and methods. Seventy adult male C57BL / 6 mice were randomly divided into 7 groups (10 mice in each group). The first branch of the left trigeminal nerve was removed by anhydrous ethanol method. Tear secretion tests, corneal fluorescein staining and confocal microscopy were performed on the normal control group and the experimental group at different time points, respectively. Then the mice were killed by intraperitoneal injection of excessive pentobarbital sodium, and the left cornea and intracranial trigeminal nerve branches were taken out respectively. The cornea nerves of mice were labeled with Tubulin 尾-鈪，

本文编号：1543505