抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

发布时间：2018-03-06 12:55

  本文选题：喉肿瘤　切入点：免疫球蛋白M　出处：《泸州医学院》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)是机体免疫系统中非常重要的免疫分子,其功能主要是介导体液免疫,传统的免疫学理论认为,Ig是B淋巴细胞特有产物,机体其它细胞不产生Ig。然而,近年来人们发现Ig异位表达于多种上皮源性的恶性肿瘤组织和细胞系,初步研究表明异位表达的Ig具有生长因子样作用。我们研究小组已对IgM在多种上皮来源肿瘤组织和细胞系中的表达进行了报道,本实验旨在探讨喉鳞癌Hep-2细胞中IgM蛋白的表达情况,并对喉鳞癌Hep-2细胞表达IgM蛋白的生物学活性进行初步研究。方法：进行喉鳞癌Hep-2细胞体外培养,分别通过免疫细胞化学技术(链霉亲和素生物素法,SABC法)、免疫印记法(Western blot)以及流式细胞术(FCM)检测Hep-2细胞中IgM蛋白的表达情况；应用抗人IgM抗体,设置时间梯度和浓度梯度,通过细胞增殖抑制试验(MTS法)研究抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞生长增殖活性的影响,并对细胞形态进行观察；通过软琼脂细胞集落形成实验检测不同浓度抗人IgM抗体对Hep-2细胞增殖能力的影响；通过流式细胞仪(Annexin V/PI染色)和Hoechst染色方法,研究抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响,并观察凋亡细胞形态；应用流式细胞仪PI染色法观察抗人IgM抗体对喉鳞癌Hep-2细胞细胞周期的影响。结果：免疫细胞化学SABC法显示Hep-2细胞存在IgM蛋白表达且主要表达于细胞浆中；将Hep-2细胞的蛋白提取液进行免疫印记法检测,在分子量75KD处检出了阳性信号,提示Hep-2细胞存在IgM蛋白的表达；应用流式细胞仪间接免疫荧光法检测出Hep-2细胞的荧光强度为12.4±2.55,阳性对照组Raji细胞荧光强度为17.2±2.30,分别与阴性对照组荧光强度2.29±0.50比较差异显著(P0.05),说明IgM在喉鳞癌Hep-2细胞中有表达；MTS显示喉鳞癌Hep-2细胞的抑制率随时间延长而增高,在第三天开始出现明显抑制作用,同时喉鳞癌Hep-2细胞的抑制率随浓度增加而增高,在50μg/ml浓度开始出现明显抑制作用,说明抗人IgM抗体具有时间和浓度依赖性地抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖生长的作用(P0.05),并使细胞出现相应形态学改变；软琼脂细胞集落形成实验显示抗人IgM抗体能明显抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖能力,并具有浓度依赖性,与对照组比较有显著性差异(P0.05)；抗人IgM抗体能明显促进喉鳞癌Hep-2细胞凋亡,且使喉鳞癌Hep-2细胞呈现出典型凋亡形态改变,流式细胞仪Annexin V/PI染色和Hoechst染色方法检测Hep-2细胞凋亡率分别为(20.33±1.93)%和(20.45±3.45)%,与对照组比较差异显著(均P0.05)；流式细胞术显示抗人IgM抗体还能影响喉鳞癌Hep-2细胞的细胞周期,导致G1期细胞减少,S期细胞增多,从而使细胞周期阻滞于S期(P0.05)。结论：喉鳞癌Hep-2细胞能够表达IgM蛋白,且主要表达于Hep-2细胞浆中,抗人IgM抗体能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖能力,诱导Hep-2细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞,提示喉鳞癌细胞表达IgM具有生长因子样活性,这可能为喉鳞癌治疗提供一个新的靶点。
[Abstract]:Objective: immunoglobulin (immunoglobulin, Ig) is an important immune molecule in the body's immune system, its main function is to mediate humoral immunity, according to the traditional immunological theory, Ig is the specific product of B lymphocytes and other cells in the body does not produce Ig. however, in recent years it was found that malignant tumor of ectopic expression of Ig in epithelial tissue the source and cell lines, preliminary study showed that ectopic expression of Ig is a growth factor like role. Our research group has reported on the expression of IgM in Epitheliogenic Malignant tumor tissues and cell lines, to investigate the expression of IgM protein in laryngeal squamous cell carcinoma Hep-2 cells, and the expression of Hep-2 in laryngeal squamous cell carcinoma cells the biological activity of IgM protein was preliminarily studied. Methods: in vitro culture of laryngeal squamous cell carcinoma Hep-2 cells, respectively, by immunohistochemistry (streptavidin biotin method, SABC 娉，

本文编号：1574927