PGC-1α对鼠视网膜新生血管调控作用的研究

发布时间：2018-03-19 02:22

  本文选题：PGC-1α　切入点：视网膜新生血管　出处：《中南大学》2014年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一章PGC-1α在鼠视网膜新生血管模型中的表达 目的：建立氧诱导小鼠视网膜新生血管的模型,检测正常鼠和氧诱导视网膜新生血管模型鼠的视网膜PGC-1α的表达,探讨PGC-1α在小鼠视网膜新生血管形成过程中的作用。 方法：将鼠龄7天(P7)的健康C57BL/6J小鼠共152只,随机分成正常组(76只)和模型组(76只),正常组在空气环境中喂养,不做任何处理。模型组在(75士2)%的氧气浓度的密闭氧舱中喂养,5天后鼠龄12天(P12)时出氧舱,出舱后按时间点继续在正常空气环境中喂养,以建立氧诱导小鼠视网膜新生血管模型；正常组和模型组小鼠在鼠龄17天(P17)时行FITC-Dextran血管造影视网膜铺片,观察视网膜血管的形态和变化；石蜡组织切片HE染色观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。提取各鼠龄正常组和模型组小鼠的视网膜总RNA和总蛋白,采用Real-time PCR及Western blot技术检测视网膜各时间点组织中PGC-1α的表达水平。 结果：视网膜铺片显示：正常组小鼠视网膜血管清晰,走行规则,无新生血管生成；而模型组视网膜有大量新生血管生成及明显的荧光素渗漏和无灌注区出现；石蜡组织切片显示：模型组中有大量的新生血管内皮细胞核突破视网膜内界膜。模型组中视网膜PGC-1α mRNA和蛋白质的表达水平随着缺氧时间的延长而逐步上调,在P17时表达量上调明显； 结论：在氧诱导的小鼠视网膜新生血管模型当中,PGC-1α的表达量逐渐上调,其表达趋势与视网膜新生血管生成的时间基本同步。证明PGC-1α参与调控视网膜新生血管的形成过程。 第二章PGC-1α siRNA调控鼠视网膜新生血管的形成 目的：检测PGC-1α siRNA对视网膜新生血管形成的抑制作用,研究PGC-1α调控视网膜新生血管的作用,为视网膜新生血管性疾病提供新的治疗靶点。 方法：将鼠龄7天(P7)健康的C57BL/6J小鼠共184只,随机分成PGC-1α siRNA注射组(45只)、阴性对照组(45只)、模型对照组(49只)、和正常组(45只)。正常组在空气环境中喂养,不做任何处理。PGC-1α siRNA注射组、阴性对照组和模型对照组小鼠放置于(75士2)%的氧气浓度密闭舱中喂养5天,在鼠龄12天(P12)时出舱,出舱后继续在空气环境中喂养,建立氧诱导的视网膜新生血管的模型；其中,PGC-1α siRNA注射组在P13时予以玻璃体腔内注射lul PGC-1α siRNA-脂质体混合物；阴性对照组则在P13时予以玻璃体腔注射1ulsiRNA阴性对照-脂质体混合物；模型对照组不做任何处理。各实验组在鼠龄17天(P17)时采用Real-time PCR和Western blot技术观察小鼠视网膜PGC-1α mRNA、蛋白质和VEGF mRNA、蛋白质的表达变化；各组小鼠左心室行FITC-Dextran灌注并视网膜铺片,观察新生血管的形态和分布变化；视网膜石蜡组织切片HE染色用以观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量；免疫荧光检测PGC-la和VEGF的表达。 结果：PGC-1α siRNA注射组的视网膜PGC-1α mRNA和蛋白质表达与模型对照组相比分别下调了46.76%和47.67%,两者差异具有统计学意义(P0.05); PGC-la siRNA注射组视网膜VEGF mRNA和蛋白质的表达与模型对照组相比分别下调了48.84%和44.44%,差异具有统计学意义(P0.05)；视网膜铺片显示：PGC-1α siRNA注射组与模型对照组及阴性对照组相比较,视网膜新生血管、无灌注区都显著减少,荧光渗漏也明显减少；石蜡组织切片显示突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量上PGC-1α siRNA注射组较模型对照组减少62.28%,二者差异有统计学意义(P0.05)。 结论：PGC-1α siRNA对视网膜新生血管的形成有抑制作用,同时也证实了PGC-1α在视网膜新生血管中具有调控作用,并有望成为血管增殖性视网膜病变新的治疗靶点。图36幅,参考文献82篇
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.1

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本文编号：1632404