Butein通过线粒体途径诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡

发布时间：2018-03-22 18:41

本文选题：Butein　切入点：葡萄膜黑色素瘤细胞　出处：《吉林大学》2013年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：葡萄膜黑色素瘤是成人原发内眼肿瘤中最常见的一种肿瘤。在美国每百万人每年葡萄膜黑色素瘤的发病率在6-7例，尽管在过去的几十年内葡萄膜黑色素瘤诊断及治疗有新进展，但其预后仍然很差，大约有31%的人在诊断后5年内由于葡萄膜黑色素瘤而死亡，25年后将有半数的病人死亡，这类患者中常见转移，肝脏是转移最好发的部位。葡萄膜黑色素瘤患者10年累计转移率达34%，针对肿瘤的转移有许多的治疗措施，但是收效甚微，葡萄膜黑色素瘤肝转移患者大部分在6个月内死亡，确诊转移后平均生存时间只有3.6个月。由于葡萄膜黑色素瘤患者预后极差，急需新的治疗措施。 Butein是一种从腰果树、降香黄檀和漆树中提取的多元酚，在中国及韩国曾用来治疗各种疾病，包括胃癌。曾有研究Butein有不同的药理作用，包括抗氧化、抗炎症及抗新生血管活性，最近体内及体外研究表明Butein有抗癌活性，它能抑制不同种类的恶性肿瘤细胞的增殖并诱导这些细胞凋亡。作为有效地防癌及治癌药物，Butein受到很多关注，而对正常细胞，它的毒性很少。在动物实验模型中，Butein能抑制肝癌细胞的生长，另一项胃癌的临床实验发现这种药物耐受性好，并可能使肿瘤缩小。Butein对黑色素瘤的作用研究只有针对鼠皮肤黑色素瘤的实验，研究发现Butein可以抑制鼠B16皮肤黑色素瘤细胞的增殖并促进肿瘤细胞的凋亡，而对人葡萄膜黑色素瘤细胞的作用还没有报道，葡萄膜黑色素瘤与皮肤黑色素瘤不仅流行病学及病因学不同，分子生物学模式也不同，所以这两种黑色素瘤细胞被认为是不同的种类，应该对每种黑色素瘤细胞进行独立的研究，本研究的目的是探索Butein的细胞毒作用，研究在体外对人类葡萄膜黑色素细胞瘤可能的防止及治疗作用，并研究其对正常的人类巩膜成纤维细胞及视网膜色素上皮细胞的作用。Butein诱导葡萄膜黑色素瘤细胞生物学改变，线粒体膜电位的变化后释放细胞色素C，活化细胞凋亡蛋白酶9及3，通过这些研究阐明了Butein诱导黑色素细胞的信号通路。 1方法三种人葡萄膜黑色素瘤细胞系(M17、SP6.5和C918)，视网膜色素上皮细胞及巩膜成纤维细胞与不同浓度的Butein培养，通过MTT评价Butein对细胞活力的影响，通过流式细胞仪分析细胞的凋亡，用JC-1酶标仪评价线粒体膜电位改变，酶联免疫吸附试验分析细胞凋亡蛋白3、8、9的改变。 2结果 Butein减少培养的人葡萄膜黑色素瘤的活性，呈剂量依赖效应(10、30、100μM)，SP6.5的半数抑制浓度IC50在13.3μM，M17在15.8μM，在转移的恶性C918细胞系有类似的剂量，为16.7μM，Butein在较低的浓度时选择性的抑制葡萄膜黑色素细胞的活性，而对视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞作用较小，Butein通过增加线粒体膜通透性及增加细胞色素C及凋亡蛋白9、3（不通过凋亡蛋白8）活性诱导肿瘤细胞凋亡。 3结论 30μM Butein诱导培养的人葡萄膜黑色素细胞凋亡，所以即使都是通过同一通路引起凋亡，人葡萄膜黑色素瘤与鼠皮肤黑色素瘤细胞相比前者对Butein更加敏感。本研究表明100-300μM Butein可以杀伤3种人葡萄膜黑色素细胞瘤细胞(M17、SP6.5和C918)。C918细胞是转移性细胞系，也可被Butein抑制，表明即使是高度侵入性的葡萄膜黑色素瘤细胞系也对Butein敏感。10μM及30μMButein对正常的视网膜色素上皮细胞及巩膜成纤维细胞无影响，表明Butein对葡萄膜黑色素细胞的特殊抗肿瘤特性。用低浓度Butein培养细胞后，部分细胞被膜连蛋白染色，而不被EtD-III染色，提示存在早期的凋亡。用高浓度的Butein处理细胞后，大部分被膜连蛋白染色，一部分被EtD-III染色，提示凋亡已经处于晚期，细胞膜已经损坏。Butein损害了线粒体膜电位，增加了细胞色素C及凋亡蛋白酶9,3的表达，并呈剂量依赖性。而凋亡蛋白酶8没有明显改变。这表明Butein是通过线粒体途径引起葡萄膜黑色素细胞瘤凋亡。总之，低浓度的Butein可以诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞凋亡而对正常细胞影响较小，表明在体外Butein对人葡萄膜黑色素瘤是一个选择性的有效的细胞凋亡药物。因为转移的黑色素瘤细胞对于传统的化疗药物有很强的抗药性，，而Butein对转移的C918细胞具有杀伤作用，所以Butein可能有望成为具有转移的黑色素瘤细胞的治疗及防治药物，由于Butein的生物利用度及血浆浓度的研究刚刚起步，有必要进一步改变剂型及研究其与其他抗肿瘤药物的相互作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.7

【参考文献】