多药耐药在鼻咽癌中的作用及药物逆转的相关研究

发布时间：2018-03-29 04:10

  本文选题：鼻咽癌　切入点：多药耐药　出处：《复旦大学》2014年博士论文

【摘要】：第一部分：人鼻咽癌标本中多种耐药基因的表达目的：评估人鼻咽癌标本中多种耐药基因的表达,并初步探讨多种耐药基因的表达与治疗疗效之间的关系。方法：收集2011年4月～2012年4月期间复旦大学附属眼耳鼻喉科医院鼻内窥镜室行鼻咽部新生物活检的鼻咽部标本,共172例,其中经病理确诊为鼻咽癌的标本共75例。选择在我院接受顺铂(Cisplatin,DDP)+5-氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-FU)化疗的病人,根据病人的疗效将其分为完全缓解(Complete remission, CR)和米完全缓解(nCR)。其中nCR共8例标本。在CR中选择8例病人作为A组,将8例nCR标本作为B组。采用实时荧光定量CR (Real time PCR)检测标本中多药耐药基因的表达情况。检测基因包括：二氢啼啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPYD)、胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase, TYMP)、胸腺肽合成酶(thymidylate synthase, TS)、乳清酸转磷酸核糖基转移酶(orotate phosphoribosyl transferase, OPRT)、二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase, DHFR)、亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)、切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing gene 1, FRCC1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance relation protein, MRP)、肺耐药相关蛋白1(lung-resistance related protein 1, LRP1)、乳腺癌耐药相关蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)和拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeerase Ⅱ, TOP2A)。比较A、B两组标本中多药耐药基因表达之间的差异,并初步探讨多药耐药基因的表达和治疗疗效之间的关系。结果：所有鼻咽癌标本均不同程度表达多药耐药基因。B组鼻咽癌标本相比A组而言,ERCC1和TS表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)；其他基因表达差异不具有统计学意义(P0.05)。结论：鼻咽癌组织中存在多种多药耐药基因的表达,可能是影响鼻咽癌化疗疗效的重要因素。鼻咽癌的治疗疗效可能跟ERCC1和TS的表达呈负相关。第二部分：人鼻咽癌耐顺铂细胞系的建立及其生物学特性研究目的：建立人鼻咽癌耐顺铂(DPP)细胞系HNE1/DDP,并研究其生物学特性,为后续体外研究肿瘤耐药构造模型。方法：以DDP为诱导干预药物,以人鼻咽癌细胞HNEl为亲代细胞系,采用了大剂量冲击法与逐步增加剂量法相结合的方法,在培养基中逐渐增加DDP的浓度,体外连续培养,建成一株人鼻咽癌耐顺铂的细胞系,并命名为HNE1/DDP.比较两利细胞对鼻咽癌常用化疗药物顺铂,卡铂,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)和紫杉醇的毒性,观察耐药细胞和亲本细胞之间形态差异,制作生长曲线,并检测两种细胞的迁移和侵袭能力。结果：我们历时1年的时间成功地建立了人鼻咽癌耐顺铂细胞系HNE1/DDP,该细胞能在含DDPlug/ml的培养基中稳定生长并传代,其对DDP的耐药指数为14.75,并与卡铂、5-FU和紫杉醇等多种鼻咽癌常用的化疗药物可以产生不同程度的交义耐药：耐药细胞HNE1/DDP相比亲本细胞HNE1增殖速度稍有下降,体外群体倍增时间(doubling time, TD)较亲代细胞稍微延长(41.85 h VS 37.44 h)；但这两种细胞在迁移和侵袭能力方面无明显差别。结论：成功建立了能在含1ug/ml的顺铂培养液中稳定生长和传代的人鼻咽癌耐顺铂细胞系HNE1/DDP,该细胞具有多药耐药性,其生物学特性与亲本细胞基本相似,能作为体外研究肿瘤耐药的模型。第二部分：人鼻咽癌耐顺铂细胞系的建立及其生物学特性研究目的：建立人鼻咽癌耐顺铂(DPP)细胞系HNE1/DDP,并研究其生物学特性,为后续体外研究肿瘤耐药构造模型。方法：以DDP为诱导干预药物,以人鼻咽癌细胞HNEl为亲代细胞系,采用了大剂量冲击法与逐步增加剂量法相结合的方法,在培养基中逐渐增加DDP的浓度,体外连续培养,建成一株人鼻咽癌耐顺铂的细胞系,并命名为HNE1/DDP.比较两利细胞对鼻咽癌常用化疗药物顺铂,卡铂,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)和紫杉醇的毒性,观察耐药细胞和亲本细胞之间形态差异,制作生长曲线,并检测两种细胞的迁移和侵袭能力。结果：我们历时1年的时间成功地建立了人鼻咽癌耐顺铂细胞系HNE1/DDP,该细胞能在含DDPlug/ml的培养基中稳定生长并传代,其对DDP的耐药指数为14.75,并与卡铂、5-FU和紫杉醇等多种鼻咽癌常用的化疗药物可以产生不同程度的交义耐药：耐药细胞HNE1/DDP相比亲本细胞HNE1增殖速度稍有下降,体外群体倍增时间(doubling time, TD)较亲代细胞稍微延长(41.85 h VS 37.44 h)；但这两种细胞在迁移和侵袭能力方面无明显差别。结论：成功建立了能在含1ug/ml的顺铂培养液中稳定生长和传代的人鼻咽癌耐顺铂细胞系HNE1/DDP,该细胞具有多药耐药性,其生物学特性与亲本细胞基本相似,能作为体外研究肿瘤耐药的模型。第三部分：鼻咽癌细胞多药耐药的表达及药物逆转研究第三部分：鼻咽癌细胞多药耐药的表达及药物逆转研究目的：探讨鼻咽癌耐顺铂细胞HNE1/DPP和亲本细胞HNE1之间多药耐药表达的差异,并初步研究利多卡因对HNE1/DPP细胞的药物逆转作用。方法：采用RT-PCR,免疫荧光(Immunofluorescence, IF)和Western-Blot分别从mRNA水平和蛋白质水平检测鼻咽癌耐顺铂细胞HNE1/DPP和亲本细胞HNE1之间多种多药耐药的表达。检测的指标如下,二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase, DPYD)、胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase, TYMP)、胸腺肽合成酶(thymidylate synthase,TS)、乳清酸转磷酸核糖基转移酶(orotatephosphoribosyl transferase,OPRT)、二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase, DHFR)、亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)、切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing gene 1, ERCC1)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、血管内皮生长因了-A (vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance relation protein, MRP)、肺耐药相关蛋白1(lung-resistance related Protein 1, LRP1)、乳腺癌耐药相关蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)和拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeerase Ⅱ, TOP2A)。同时采用线粒体膜电位法(JC-1),活性氧(ROS)检测法和流式细胞仪检测凋亡法(Annexin V-FICT/PI)初步探索利多卡因逆转HNE1/DPP细胞对顺铂的耐药性。结果：RT-PCR, IF和Western-Blot结果显示,多药耐药基因在鼻咽癌耐顺铂细胞HNE1/DPP和鼻咽癌细胞HNE1中均有不同程度表达,且多种多药耐药基因表达存在差异。在培养液中加入小于毒副作用的利多卡因后,HNE1/DPP细胞对顺铂的敏感性提高,可以部分逆转该细胞对顺铂的耐药性。结论：HNE1/DPP细胞的耐药性可能涉及多种不同的耐药机制。利多卡因可以作为一种化学增敏剂部分逆转HNE1/DPP细胞对顺铂的耐药性。
[Abstract]:In the first part , the expression of multiple drug resistant genes in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) specimens was analyzed . The expression of multiple drug resistance genes in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) specimens was evaluated . epidermal growth factor receptor ( EGFR ) , vascular endothelial growth factor - A ( VEGF - A ) , multidrug resistance related protein ( MRP ) , lung - resistance related protein 1 ( LRP1 ) , breast cancer resistance protein , and topoisomerase鈪∥，

本文编号：1679487