端粒酶逆转录酶TERT促进人喉癌细胞Hep-2增殖作用及机制的研究

发布时间：2018-04-10 23:18

  本文选题：喉癌 + 端粒酶逆转录酶　； 参考：《武汉大学》2013年博士论文

【摘要】：目的：研究端粒酶逆转录酶(TERT)在喉癌细胞增殖过程中的作用,研究c-fos和c-jun二联体在TERT促进喉癌细胞增殖过程中的作用。方法：CCK-8法分别检测Ad-TERT和Ad-shTERT腺病毒载体处理前后的喉癌Hep-2细胞增殖能力的变化；real-time PCR法检测Ad-TERT和Ad-shTERT腺病毒载体处理前后的喉癌Hep-2细胞中TERT、c-fos以及c-jun mRNA的表达；RT-PCR法检测32例喉癌组织中TERT、c-fos和c-jum mRNA的表达；量子点标记免疫荧光法检测54例喉癌组织切片中TERT、c-fos和c-jun蛋白的表达；spearman相关性检验比较TERT与c-fos、c-jun表达的相关性。 结果：Ad-TERT腺病毒载体处理后,Hep-2细胞的增殖速率增加55%, TERT mRNA表达分别增加59%, c-fos mRNA表达分别增加52%,c-jun mRNA表达分别增加51%。Ad-shTERT腺病毒载体处理后,Hep-2细胞的增殖速率降低46%、。TERT mRNA表达分别减少70%, c-fos mRNA表达分别减少79%, c-jun mRNA表达分别减少71%。RT-PCR法检测32例喉癌组织中TERT/actin mRNA表达比值为(0.003～0.969), c-fos/actin mRNA表达比值为(0.001-2.768),c-jun/actin mRNA表达比值为(0.015-1.587), spearman相关性检验比较TERT/actin与c-fos/actin mRNA表达相关系数r=0.659(P0.01),TERT/actin与c-jun/actin mRNA表达相关系数r=0.763(P0.01),c-fos/actin与c-jun/actin mRNA表达相关系数r=0.929(P0.01)。量子点标记免疫荧光法检测54例喉癌组织切片中TERT与c-fos、c-jun表达部位一致率分别为85%和82%,TERT表达阳性率为(36%-61%),c-fos表达阳性率为(32%-55%),c-jun表达阳性率为(40%-67%),spearman相关性检验比较TERT与c-fos蛋白表达相关系数r=0.712(P0.01),TERT与c-jun蛋白表达相关系数r=0.683(P0.01),c-fos与c-jun蛋白表达相关系数r=0.958(P0.01)。 结论：TERT在促进喉癌细胞增殖过程中发挥了非常重要的作用,靶向沉默TERT mRNA后c-fos和c-jun mRNA表达均明显降低,过表达TERT后c-fos和c-jun mRNA表达均明显增高。c-fos和c-jun的表达呈高度相关,与文献中报道c-fos和c-jun通常是以二联体形式存在一致。c-fos、c-jun与TERT在喉癌中的表达呈中-高度相关,且相关性具有显著统计学意义,我们推测在TERT促进喉癌细胞增殖的过程中,c-fos和c-jun二联体发挥了重要的作用,但其具体机制仍需进一步研究。
[Abstract]:Aim: to study the role of telomerase reverse transcriptase (TERT) in the proliferation of laryngeal carcinoma cells and the role of c-fos and c-jun dimer in the process of TERT promoting the proliferation of laryngeal cancer cells.Methods Ad-TERT and Ad-shTERT adenovirus vectors were used to detect the proliferative ability of Hep-2 cells before and after treatment with Ad-TERT and Ad-shTERT adenovirus vectors respectively. The expression of TERTc-fos and c-jun mRNA in Hep-2 cells of laryngeal carcinoma before and after Ad-TERT and Ad-shTERT adenovirus vector treatment were detected by real-time PCR method. RT-PCR was used to detect the expression of TERTc-fos and c-jun mRNA in Hep-2 cells treated with Ad-TERT and Ad-shTERT adenovirus vectors.Expression of TERTnc-fos and c-jum mRNA in laryngeal carcinoma;The expression of TERTnc-fos and c-jun protein in 54 cases of laryngeal carcinoma was detected by quantum dot immunofluorescence method. The correlation between TERT and c-fos-c-jun expression was compared by Spearman correlation test.Results the proliferation rate of Hep-2 cells was increased by 55% Ad-TERT adenovirus vector, the expression of TERT mRNA and c-fos mRNA were increased, respectively. The expression of c-fos mRNA and c-jun mRNA were increased, respectively. The proliferation rate of Hep-2 cells was decreased by 46T mRNA after treatment with 51%.Ad-shTERT adenovirus vector.By 71%.RT-PCR method, the expression ratio of TERT/actin mRNA and c-fos/actin mRNA in 32 cases of laryngeal carcinoma was 0.003 ~ 0.969 and 0.001-2.768, respectively. The expression ratio of c-fos mRNA and c-jun mRNA were 0.015-1.587. spearman correlation test compared TERT/actin with c-fos/actin mRNA.The correlation coefficient between the expression of TERT / actin and the expression of c-jun/actin mRNA was 0.763P0.01and the correlation coefficient between c-fos-ractin and c-jun/actin mRNA expression was 0.929 and P0.01.The correlation coefficient between the expression of c-jun protein and the expression of TERT was 0.683P0.01. the correlation coefficient between c-fos and c-jun protein was 0.958 and P0.01.Conclusion the expression of c-fos and c-jun mRNA decreased after targeted silencing of TERT mRNA, and the expression of c-fos and c-jun mRNA increased significantly after overexpression of TERT. The expression of c-fos and c-jun were highly correlated.The expression of c-fos and c-jun in laryngeal carcinoma was significantly correlated with that of c-fos and c-jun in laryngeal carcinoma, and there was a significant correlation between c-fossil-c-jun and c-jun in laryngeal carcinoma, and there was a significant correlation between c-fossil-c-jun and c-jun in laryngeal carcinoma.We speculate that TERT plays an important role in promoting the proliferation of laryngeal cancer cells, but its mechanism needs further study.
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.65

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本文编号：1733384