RNAi沉默SOX2表达增强Hep-2化疗药物敏感性作用研究

发布时间：2018-05-20 07:20

  本文选题：喉肿瘤 + SOX　； 参考：《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》2014年16期

【摘要】：目的:研究SOX2表达对人喉癌上皮细胞Hep-2化疗敏感性的影响。方法:设计合成RNAi-SOX2序列,瞬时转染Hep-2细胞,Western blot法筛选沉默效率最好的RNAi-SOX2构建pGCsi-H1-SOX2质粒,并构建其对照质粒pGCsi-H1-NC,分别转染Hep-2细胞建立稳定沉默SOX2表达细胞株psiSOX2-Hep-2及其对照细胞株psiNC-Hep-2。CCK-8法检测SOX2表达沉默对Hep-2细胞对化疗药物敏感性的影响;Hoechst染色法检测SOX2表达沉默对化疗药物诱导Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot法检测SOX2表达沉默对凋亡相关基因Survivin、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表达的影响。结果:成功获取SOX2表达沉默细胞株psiSOX2-Hep-2及其对照psiNC-Hep-2细胞株,与psiNC-Hep-2细胞相比,psiSOX2-Hep-2中SOX2表达下降78%。SOX2表达沉默后,psiSOX2-Hep-2细胞对5-FU和紫杉醇的敏感性均增强,psiSOX2-Hep-2细胞48h的IC50值分别下降到8.12μg/ml和5.16μg/ml;同时,psiSOX2-Hep-2细胞凋亡数增多;抗凋亡基因Survivin、Bcl-2表达下降明显,凋亡基因Bax、cleaved caspase-3表达显著上升。结论:RNAi沉默SOX2表达将显著增强人喉癌上皮细胞Hep-2对5-FU和紫杉醇的敏感性。
[Abstract]:Objective: to study the effect of SOX2 expression on the chemosensitivity of human laryngeal carcinoma epithelial cells to Hep-2. Methods: the RNAi-SOX2 sequence was designed and synthesized, and the pGCsi-H1-SOX2 plasmid was constructed by transient transfection of Hep-2 cells by Western blot method, which had the best silencing efficiency. The control plasmid pGCsi-H1-NCwas constructed and transfected into Hep-2 cells to establish a stable and silenced SOX2 expression cell line psiSOX2-Hep-2 and a control cell line psiNC-Hep-2.CCK-8 to detect the effect of SOX2 expression silencing on the sensitivity of Hep-2 cells to chemotherapeutic drugs. Hoechst staining method was used to detect the expression of SOX2 in Hep-2 cells. The effect of SOX2 silencing on apoptosis of Hep-2 cells induced by chemotherapeutic drugs. The effect of SOX2 silencing on the expression of survivin Bcl-2Baxax-cleaved caspase-3 was detected by Western blot. Results: SOX2 expressing silencing cell line psiSOX2-Hep-2 and its control psiNC-Hep-2 cell line were successfully obtained. The decrease of SOX2 expression in psiSOX2-Hep-2 cells compared with that in psiNC-Hep-2 cells. The sensitivity of psiSOX2-Hep-2 cells to 5-FU and paclitaxel increased to 8.12 渭 g/ml and 5.16 渭 g / ml, respectively, and the number of apoptosis of psiSOX2-Hep-2 cells increased, and the expression of anti-apoptotic gene survivin decreased significantly. The expression of apoptotic gene Baxia cleaved caspase-3 increased significantly. Conclusion silencing the expression of SOX2 in human laryngeal carcinoma cells by SOX2 silencing can significantly enhance the sensitivity of Hep-2 to 5-FU and paclitaxel.
【作者单位】： 中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科;
【基金】：辽宁省自然科学基金项目(No:201202287)
【分类号】：R739.65

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