利用RNAi阻抑hTERT和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

发布时间：2018-05-21 13:25

  本文选题：人类端粒酶末端逆转录酶 + bax　； 参考：《重庆医学》2015年08期

【摘要】：目的利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶(hTERT)和Bax inhibitor-1(Bi-1)基因设计并构建的质粒载体转染至CNE-2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT和Bi-1基因表达的效果。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、pEGFP-N1组、pEGFP-N1/Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE-2Z细胞的转染能力,RT-PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi-1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE-2Z细胞的质粒和Lip最佳组合:质粒为2.5μg,Lip为6.25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi-1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi-1基因的表达。
[Abstract]:Objective to transfect the plasmid vector targeting human telomerase terminal reverse transcriptase (hTERT) and Bax inhibitor-1 (Bi-1) gene into CNE-2Z nasopharyngeal carcinoma cells by LipofectamineTM2000 to induce sequence-specific gene silencing. To study the inhibitory effect of shRNA on the expression of hTERT and Bi-1 genes. Methods CNE-2Z cells were collected and divided into untreated group (pEGFP-N1) and pEGFP-N1 / Lip group. The transfection ability of Lip to CNE-2Z cells was detected by flow cytometry. RT-PCR and Western blot were used to analyze the inhibitory effect of recombinant plasmid vector expressing shRNA on mRNA expression of hTERT and Bi-1 gene. Results the best combination of plasmid and Lip was 2.5 渭 g lip and 6.25 渭 L. Conclusion the successfully constructed shRNA eukaryotic expression plasmid targeting human hTERT and Bi-1 genes can specifically inhibit the expression of hTERT and Bi-1 genes.
【作者单位】： 广东省中医院检验科;广州医科大学附属脑科医院检验科;广东医学院生物化学与分子生物学研究所;
【基金】：广东省科技计划项目基金资助项目(2011B031800207)
【分类号】：R739.63

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本文编号：1919373