TRAIL联合DDP对人视网膜母细胞瘤株HXO-Rb44的增殖抑制作用

发布时间：2018-06-06 20:56

  本文选题：HXO-RB44细胞 + TRAIL　； 参考：《昆明医学院》2011年硕士论文

【摘要】：目的： 通过研究TRAIL对人视网膜母细胞瘤株HXO-RB44细胞的增殖抑制率、细胞周期的影响、诱导细胞凋亡的情况等,探讨TRAIL对HXO-RB44细胞的增殖抑制作用。通过研究TRAIL与DDP联合应用对HXO-RB44细胞的增殖抑制作用,探讨TRAIL与DDP联合化疗方案如何减少药物的用药剂量,增强药物疗效,并为临床应用提供细胞学研究依据。 方法： 体外培养人视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44细胞,采用对数生长期的细胞进行实验。TRAIL以五种不同浓度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml), DDP以四种不同浓度(1.0mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L和50.0mg/L),分别单独作用于HXO-RB44细胞,在24小时、48小时、72小时后,用MTT比色法检测相应的肿瘤细胞增殖抑制率,并观察在不同时间段TRAIL与DDP对细胞形态及凋亡的影响。根据上述实验结果,选取对HXO-RB44细胞有明显抑制作用的TRAIL浓度T(200ng/ml TRAIL)和DDP浓度D(10.0 mg/L DDP)为基准,分别设计三种浓度梯度为：1/2T、T、2T,1/2D、D、2D,分别作用于HXO-RB44细胞,并分别在24小时、48小时、72小时后,用流式细胞术PI单染法测定细胞周期变化,TUNEL法检测细胞凋亡的情况。倒置显微镜下观察HXO-RB44细胞的微观形态学改变。选用T浓度TRAIL作用48小时的HXO-RB44细胞进行透射电镜观察。 取TRAIL(T代表200ng/ml TRAIL的浓度)与DDP(D代表10.0 mg/L DDP的浓度)分别配成四种方案,即实验组(T+1/2D、T+D、1/2T+D、2T+D),并设阴性对照组和阳性对照组(D、1/2T、T、2T),以上各组分别作用于HXO-RB44细胞,分别在24小时、48小时、72小时后,用MTT法检测细胞增殖抑制率。 结果： 一、TRAIL作用于HXO-RB44细胞对其增殖抑制作用较为明显。TRAIL浓度为200ng/ml时,细胞抑制率明显增加。TRAIL作用于HXO-RB44细胞48小时对该细胞的增殖抑制率最大,之后细胞增殖抑制率有下降趋势。 流式细胞仪细胞周期检测显示：TRAIL作用24小时、48小时、72小时后G2/M期、G0/G1期及S期细胞所占比率,分别与对照组比较,差异缺乏统计学意义(P0.05)。 流式细胞仪TUNEL法检测细胞凋亡显示：100ng/ml TRAIL作用于HXO-RB44细胞24小时、48小时、72小时后,细胞凋亡率分别是：3.13%±0.09%、26.17%±1.04%、50.04%±0.91%、200ng/ml*TRAIL作用于HXO-RB44细胞24小时、48小时、72小时后,细胞凋亡率分别是：3.43%±0.37%、29.25%±0.67%、58.91%±0.2%。400ng/ml TRAIL作用于HXO-RB44细胞24小时、48小时、72小时后,细胞凋亡率分别是：23.89%±0.85%、51.65%±1.06%、60.32%±0.63%。三个TRAIL实验组的细胞凋亡率在48小时、72小时均高于对照组,两两比较差异有统计学意义(P0.01)。相同TRAIL组在不同时间点的细胞凋亡率两两比较差异有统计学意义(P0.01)。随着TRAIL浓度的增加和作用时间的延长,细胞凋亡率增加,呈量效时效相关性。 倒置显微镜下观察：细胞逐渐减少甚至稀疏,粘附成团的细胞结合力下降,出现松散漂浮个体。随着用药浓度的增加和作用时间的延长,细胞有越来越稀疏的趋势。透射电镜下观察：细胞核发生染色体边集、固缩,新月体形成,电子密度增强,线粒体体积增大,肿胀呈空泡状,可见细胞丫生出泡现象,形成典型的凋亡小体。 二、MTT法检测不同药物浓度方案在24小时、48小时、72小时后对HXO-RB44细胞的增殖抑制率显示：实验组TRAIL与DDP搭配的治疗方案,细胞抑制率均有明显提高,分别与单独应用TRAIL和DDP的阳性对照组比较显著性差异有统计学意义(P0.01)。其中TRAIL(200ng/ml)+ DDP(10ug/ml)组在24小时、48小时、72小时的抑制率明显优于其他三组,实验组组间两两比较显著性差异有统计学意义(P0.01)。阳性对照组和四个实验组的细胞增殖抑制率均在48小时时最大,之后有下降趋势。 结论： 1. TRAIL对HXO-RB44细胞有增殖抑制作用,48小时内抑制作用随时间延长而增大,其后抑制作用有逐渐降低趋势。 2. TRAIL对HXO-RB44的细胞周期没有明显的影响。 3. TRAIL可诱导HXO-RB44细胞凋亡,细胞凋亡率随药物作用时间的延长及用药浓度的增加而增大。 4. TRAIL与DDP联合应用时,可增强DDP对HXO-RB44细胞的细胞毒活性,减少其药物剂量,降低其毒副反应,提高肿瘤细胞对TRAIL的敏感性,两药有协同抗肿瘤的作用。
[Abstract]:Objective:
The inhibitory effect of TRAIL on the proliferation of HXO-RB44 cells of human retinoblastoma, the effect of cell cycle and the induction of cell apoptosis, and so on, and to explore the inhibitory effect of TRAIL on the proliferation of HXO-RB44 cells. Through the study of the inhibitory effect of TRAIL and DDP on the proliferation of HXO-RB44 cells, how to combine TRAIL with DDP combined with chemotherapy is discussed. Reduce the dosage of drugs, enhance the efficacy of drugs, and provide cytological evidence for clinical application.
Method锛，

本文编号：1988078