下调VEGF表达影响鼻咽癌细胞放射敏感度的机制

发布时间：2018-07-16 07:53

【摘要】：目的应用RNA干扰技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因子(VEGF)表达,研究阻断VEGF基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感度的影响及机制。方法构建针对VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA(CNE-2组)、1个阴性对照质粒(CNE-2/Neg-siRNA组)、经脂质体转染至CNE-2细胞(CNE-2/VEGF-siRNA组),用平板克隆形成实验检测在6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通过单击多靶模型、线性二次模型拟合放射生物学参数,流式细胞检测分析细胞周期和细胞凋亡的变化,用RT-PCR定量分析三组细胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表达。结果经6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后细胞存活率显著下降,CNE-2/VEGF-siRNA组细胞经D0和2 Gy照射后的存活分数明显低于CNE-2组、CNE-2/Neg-siRNA组;CNE-2/VEGF-siRNA组中G1/S期细胞周期阻滞更为明显。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中,Cyclin D1mRNA表达在放疗后6、12和24 h进行性升高,差异有统计学意义,而其他基因变化差异无统计学意义,Western blot检测显示Cyclin D1蛋白表达在放疗后24 h明显升高。结论下调VEGF表达可增加鼻咽癌细胞的放射敏感度,其机制可能是通过Cyclin D1信号通路途径使细胞周期发生G1/S期阻滞。
[Abstract]:Objective to inhibit the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human nasopharyngeal poorly differentiated squamous cell carcinoma cell line CNE-2 by RNA interference, and to study the effect of blocking VEGF gene expression on the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells and its mechanism. Methods the eukaryotic expression vector pU-VEGF-siRNA for VEGF (CNE-2 group) and a negative control plasmid (CNE-2 / Neg-siRNA group) were constructed and transfected into CNE-2 cells (CNE-2 / VEGF-siRNA group) by liposome. The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry, and the mRNA expression of Cyclin D _ 1 Cyclin E _ (16) and P _ (53) were quantitatively analyzed by RT-PCR. Results the survival rate of CNE-2 / VEGF-siRNA group was significantly lower than that of CNE-2 / Neg-siRNA group after irradiation with D0 and 2 Gy, and the cell cycle arrest of G _ 1 / S phase in CNE-2 / VEGF-siRNA group was significantly lower than that in CNE-2 / Neg-siRNA group. The expression of Cyclin D1 mRNA in the p16 and p53 genes of Cyclin D1 gene increased progressively at 12 and 24 hours after radiotherapy, but there was no significant difference in other gene changes. Western blot analysis showed that the expression of Cyclin D1 protein increased significantly at 24 hours after radiotherapy. Conclusion down-regulation of VEGF expression can increase the radiosensitivity of nasopharyngeal carcinoma cells, and the mechanism may be that the cell cycle is blocked by Cyclin D1 signaling pathway in G _ 1 / S phase.
【作者单位】： 宜昌市第二人民医院·肿瘤医院;
【分类号】：R739.63

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本文编号：2125741