喉癌及下咽癌SPARC基因的异常甲基化

发布时间：2018-07-28 10:42

【摘要】：目的：研究富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因在喉癌及下咽癌细胞系及组织中的表达水平以及启动子区甲基化状态,探讨SPARC对喉癌及下咽癌发生发展所起的作用。 方法：逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测5株头颈肿瘤细胞系、51例喉癌下咽癌组织及9例配对相邻正常上皮组织中SPARC基因的mRNA表达；甲基化特异性PCR (MSP)检测上述样本中SPARC基因的甲基化状态；亚硫酸氢盐测序(BISQ)检测细胞系、肿瘤组织及正常组织样本中SPARC基因启动子区甲基化位点；甲基化转移酶抑制剂5-aza-dC处理SPARC表达失活的肿瘤细胞系,观察SPARC基因的表达恢复情况；统计学方法分析SPARC异常甲基化的临床意义。 结果：SPARC基因在5个头颈肿瘤细胞系中表达沉默,在SPARC基因启动子区CpG岛甲基化的肿瘤组织中,SPARC的表达量明显低于其非甲基化的肿瘤组织(P0.05)。而肿瘤组织SPARC基因的表达与相邻正常上皮组织相比较无明显差异。在56.1%(23/41)喉癌及70.0%(7/10)下咽癌组织中SPARC基因启动子区呈现异常甲基化状态,而相邻配对正常上皮组织仅有11.9%(1/9)。肿瘤细胞系及肿瘤组织中SPARC基因启动子区CpG岛的CG位点出现异常甲基化。在淋巴转移的喉癌及下咽癌的病例中甲基化频率明显高于无转移者。 结论：在喉癌及下咽癌中SPARC基因高甲基化为频发事件,SPARC可作为用于喉癌及下咽癌的诊断及预后的一种潜在生物分子标记。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of cysteine-rich acidic secretory protein (SPARC) gene in laryngeal and hypopharyngeal cancer cells and its promoter methylation status, and to explore the role of SPARC in the occurrence and development of laryngeal and hypopharyngeal carcinoma. Methods: reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the mRNA expression of SPARC gene in 5 head and neck tumor cell lines in 51 cases of hypopharyngeal carcinoma and 9 cases of adjacent normal epithelium. Methylation of SPARC gene was detected by methylation specific PCR (MSP), methylation site of SPARC gene promoter in tumor tissue and normal tissue was detected by (BISQ) sequencing. Methyltransferase inhibitor 5-aza-dC treated SPARC inactivated tumor cell lines and observed the recovery of SPARC gene expression. The clinical significance of SPARC abnormal methylation was analyzed by statistical method. Results the expression of SPARC gene was silenced in 5 head and neck tumor cell lines, and the expression of SPARC in CpG island methylated tumor tissue of SPARC gene promoter was significantly lower than that in non-methylated tumor tissue (P0.05). However, the expression of SPARC gene in tumor tissues was not significantly different from that in adjacent normal epithelial tissues. In 56.1% (23 / 41) of laryngeal carcinoma and 70.0% (7 / 10) of hypopharyngeal carcinoma, the promoter region of SPARC gene showed abnormal methylation, while that of adjacent paired normal epithelium was only 11.9% (1 / 9). There was abnormal methylation in CpG island of SPARC gene promoter in tumor cell line and tumor tissue. The frequency of methylation in laryngeal and hypopharyngeal carcinoma with lymphatic metastasis was significantly higher than that without metastasis. Conclusion: the hypermethylation of SPARC gene in laryngeal and hypopharyngeal carcinoma can be used as a potential biomolecular marker for diagnosis and prognosis of laryngeal and hypopharyngeal carcinoma.
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R739.65

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本文编号：2149840