优化培养条件下人脂肪干细胞的视网膜神经保护作用的研究

发布时间：2018-08-29 07:25

【摘要】：目的：检测多能成体祖细胞(MAPC)的培养条件对人脂肪干细胞(hADSCs)生长的影响,旨在获得更适合治疗视网膜变性疾病的供体细胞。 方法：通过细胞形态观察、MTT实验、克隆形成率、PCR检测、以及成脂、成骨、成软骨分化潜能检测等,研究MAPC培养条件下hADSCs的特征,并用MAPC培养处理的hADSCs进行RCS大鼠视网膜下腔移植,通过视网膜电图(ERG)和TUNEL检测,判断细胞移植治疗对视功能及视网膜细胞凋亡的影响。 结果：MAPC培养处理的hADSCs细胞增殖能力及克隆形成率均增强,形成的克隆较大且可稳定传10代以上,且具有成脂、成骨、成软骨的多向分化潜能,细胞表面标记物及细胞因子出现差异表达：CD140b、CD90、CD47、HGF和PEDF显著上调,CD73、CD105和IL-6显著下调。与未治疗的RCS视网膜相比,移植MAPC培养条件处理的hADSCs(P4)3周后,RCS大鼠的B波波幅明显升高,外核层细胞凋亡明显减少。 结论：MAPC培养条件处理的hADSCs显示出更好的视网膜神经保护作用,适合用于治疗视网膜退行性疾病。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of (MAPC) culture conditions on the growth of human adipose stem cells (hADSCs) in order to obtain more suitable donor cells for the treatment of retinal degeneration. Methods: the characteristics of hADSCs in MAPC culture were studied by means of cell morphology observation, clone formation rate and polymerase chain reaction (PCR), lipogenesis, osteogenesis, cartilage differentiation potential and so on. HADSCs cultured with MAPC was used for subretinal cavity transplantation in RCS rats. The effects of cell transplantation on visual function and retinal cell apoptosis were evaluated by electroretinogram (ERG) and TUNEL detection. Results the proliferation ability and clone formation rate of hADSCs cells treated with WMAPC were enhanced, and the clones formed were large and stable for more than 10 generations, and had the potential of fat-forming, osteogenesis and cartilage differentiation. The expression of cell surface markers and cytokines were significantly up-regulated by the expression of: CD140, CD90, CD47, HGF and PEDF, and the down-regulation of CD73, CD105 and IL-6 were observed. Compared with the untreated RCS retina, the B wave amplitude of hADSCs (P4) treated with MAPC culture condition was significantly increased and the apoptosis of the outer nuclear layer cells was significantly decreased 3 weeks after transplantation. Conclusion the hADSCs treated by WMA PC has better neuroprotective effect on retina and is suitable for the treatment of retinal degenerative diseases.
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.1

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本文编号：2210597