白介素27和芳香烃受体在Vogt-小柳原田综合征和Behcet病发病机制中作用的研究

发布时间：2018-10-24 10:44

【摘要】：背景葡萄膜炎通常是指发生于葡萄膜、视网膜及视网膜血管的炎症疾病。多为葡萄膜炎多发生于青壮年，往往反复发作，治疗棘手，并且由于导致视网膜和视神经的损害，其所致盲为不可逆和永久性盲目。VKH综合征是一种以葡萄膜炎、脑膜刺激征、白癜风和听力损害为特征的自身免疫性疾病。Behcet病是一种以葡萄膜炎、复发性口腔溃疡和生殖器溃疡、多形性皮肤病变、常伴发自行消退和恶化为特征的多系统、多器官受累的炎症性疾病。Behcet病、VKH综合征是我国致盲率最高和最常见的葡萄膜炎类型，两者的病因目前还不清楚，但自身免疫反应失调参与了两种疾病的发生，据报道这两种疾病中都存在Th17和Treg细胞功能和数量的异常。白介素27（IL-27）主要由抗原提呈细胞分泌产生，在自身免疫动物模型中发现IL-27可以通过抑制Th17极化和促进调节性T细胞的诱导从而抑制炎症的发生和发展。但是，IL-27在人类自身免疫性疾病中的作用还不是很清楚。最近研究报道发现芳香烃受体（AhR）可以参与自身免疫性疾病的发生和发展。AhR的配体ITE可以抑制EAE的炎症严重程度，AhR基因缺陷的巨噬细胞分泌更多的炎性细胞因子。但AhR在人类自身免疫性疾病的确切作用尚不清楚。基于上述研究背景，本课题主要进行以下两方面的实验：1.探讨IL-27和AhR在VKH综合征或Behcet病患者的表达水平，以期确定其是否参与这两种疾病的发生和发展。2.进一步探讨IL-27和AhR在这两种疾病发生中的作用及机制。通过上述研究，以期阐明这两种疾病的发生机制，为其防治提供新策略和新靶点。第一部分IL-27在Vogt-小柳原田综合征发病机制作用中的研究目的：尽管VKH综合征被认为是一种自身免疫性疾病，但是其确切的发病机制尚不清楚。在动物模型的研究中发现IL-27是促炎T细胞免疫反应的抑制者。在此，我们主要探讨IL-27在Vogt-小柳原田综合征发病中所起的作用。方法：分别抽取VKH综合征的活动期和静止期患者，正常对照组的外周静脉血，分离外周血单个核细胞，使用荧光定量PCR技术检测IL-27P28和EBI3的mRNA表达水平；使用ELISA方法检测血清，PBMCs，naiveCD4+T细胞和DC-T细胞共培养上清中的细胞因子水平。利用流式技术检测IL-17阳性T细胞的比例。结果：（1）活动期VKH患者PBMCs中IL-27p28mRNA（IL-27独有的亚单位）水平显著低于VKH静止期患者和正常对照组，而三组中EBI3mRNA的表达水平无统计学差异。活动期VKH患者中IL-27血清水平显著低于静止期患者和正常对照组，而静止期患者和正常对照组之间没有统计学差异。活动期Vogt-小柳原田综合征患者PBMCs无论是否有SAC刺激，其培养上清中IL-27水平显著低于静止期患者和正常对照组，而静止期VKH综合征患者和正常对照组的PBMC是否SAC刺激，，其培养上清中IL-27水平无统计学差异。（2）活动期VKH综合征患者PBMCs中产生IL-17阳性的CD4+T细比例显著高于静止期VKH患者和正常对照组，而在静止期VKH患者和正常对照组之间分泌IL-17阳性的CD4+T细胞比例无统计学差异。（3）重组IL-27显著抑制VKH患者和正常对照组中na ve CD4+T细胞向Th17细胞分化和IL-17分泌. IL-27处理的DC可以显著抑na ve CD4+T细胞向Th17细胞分化。（4） IL-27显著促进na ve CD4+T细胞分泌IL-10，而且活动期VKH综合征患者的naiveCD4+T细胞在IL-27的刺激下分泌IL-10的水平显著低于静止期患者和正常对照组。（5） VKH患者经过药物治疗后，血清中IL-27水平显著升高，PBMCs分泌IL-27水平也显著上调，体外实验发现糖皮质激素可以显著促进PBMCs分泌IL-27，而环孢素对IL-27分泌没有影响。结论：我们的结果显示：活动期VKH患者中IL-27表达降低可能导致Th17细胞的高表达，进而参与了疾病的发生和发展。调节IL-27将可能为治疗此类疾病提供一个新策略。第二部分芳香烃受体在Behcet病发病机制中作用的研究目的：最新研究发现芳香烃受体（AhR）在免疫和炎症反应中起着重要作用。AhR通过与其配体（例如非毒性的FICZ和ITE）发挥作用。Behcet病是一个自身炎症性疾病，在本项目研究中，我们探讨AhR在Behcet病发病机制中的作用及其机制。方法：分别抽取活动期Behcet病患者、静止期Behcet病患者和正常对照组的外周血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），磁珠分离单核细胞和CD4+T细胞。利用荧光定量PCR的方法检测PBMCs中AhR表达水平，利用ELISA方法检测PBMCs培养上清， CD4+T细胞培养上清，DCs和DC/T细胞共培养上清中细胞因子水平；利用流式检测产生IL-17和INF-γ的CD4+T细胞比例。结果：（1） AhR在活动期Behcet病患者PBMCs中mRNA表达水平降低。活动期Behcet病患者PBMCs在anti-CD3/CD28的刺激下分泌IL-17，IFN-γ和IL-22的水平显著高于正常对照组。FICZ和ITE能够显著抑制Behcet病患者和正常对照组PBMCs分泌IL-17，IFN-γ，并可以显著促进其分泌IL-22。（2）活动期Behcet病患者CD4+T细胞分泌IFN-γ, IL-17和IL-22的水平显著高于正常对照组。而且FICZ和ITE可以抑制CD4+T细胞分泌IFN-γ和IL-17，而对IL-22分泌具有促进作用。在FICZ和ITE对CD4+T细胞作用的过程中，FICZ和ITE能够显著上调STAT3和STAT5的磷酸化水平，而对于STAT1和STAT4的磷酸化水平没有统计学的影响。FICZ和ITE不仅可以分别显著抑制Th1和Th17细胞重要的转录因子T-bet和RORC表达，而且对Th17细胞功能和亚型维持的分子IL-23R和CCR6也有显著的抑制作用。（3）FICZ和ITE可以显著抑制活动期Behcet病患者和正常对照组中LPS-处理的DCs表面HLA-DR，CD80和CD86分子的表达水平，对DCs表面CD40和CD83的表达水平没有统计学影响。（4）活动期Behcet病患者LPS处理的DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α水平显著高于正常对照组。FICZ和ITE能够显著抑制活动期Behcet病患者和正常对照组DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α。而对于抗炎因子，FICZ和ITE能够促进活动期Behcet病患者和正常对照组DCs分泌IL-10。（5）FICZ和ITE对DC启动的Th1和Th17细胞极化具有抑制作用。结论：本部分研究显示了AhR的表达降低与Behcet病的活动性相关，AhR活化降低导致了Th1和Th17细胞免疫反应的上调。AhR活化还可以控制DC的分化、成熟和功能。因此，调节AhR激活可能为治疗此类疾病提供了一个新策略。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R773.9

【参考文献】