当前位置:主页 > 医学论文 > 眼科论文 >

shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究

发布时间:2018-11-16 07:24
【摘要】: 目的:构建survivin shRNA干扰质粒载体,用于转染人鼻咽癌细胞株CNE2,体内、体外观察suvivin shRNA表达载体对CNE2细胞survivin基因/蛋白表达、细胞凋亡、细胞增殖和放射敏感性的影响,从而为临床鼻咽癌的基因治疗奠定实验基础。 方法:①根据survivin的cDNA序列设计构建survivin shRNA重组质粒pGenesil-1-survivin及阴性对照重组质粒pGenesil-1-HK,经酶切和测序鉴定正确后,分别提取两重组质粒转染CNE2细胞;②实验分为空白对照CNE2细胞组(简称CNE)、阴性对照重组质粒pGenesil-1-HK组(简称HK)和survivin shRNA重组质粒pGenesil-1-survivin组(简称SURVIVIN),分别进行体内、外实验;③瞬时转染48h时,FCM检测细胞凋亡,RT-PCR测定survivin mRNA表达,以观察survivin shRNA表达载体瞬时转染CNE2 48h后对survivin基因表达的抑制作用;④G418筛选获得各重组质粒的稳定转染CNE2细胞,RT-PCR测定survivin mRNA表达,FCM和Western-blotting检测蛋白表达,MTT测定细胞增殖能力;克隆形成实验观察细胞放射敏感性;⑤将各组稳定转染CNE2细胞接种BALB/c nu/nu裸鼠,建立荷瘤裸鼠模型;通过观测成瘤时间、瘤体积和瘤重量,免疫组化测定survivin蛋白表达等方法,研究survivin shRNA对人鼻咽癌CNE2细胞生长的抑制作用。 结果:①酶切和测序鉴定结果表明,成功构建survivin shRNA重质粒表达载体pGenesil-1-survivin和阴性对照质粒pGenesil-1-HK;②瞬时转染48h时,凋亡指数结果为:空白对照组(3.57±0.34)% ; pGenesil-1-HK组(3.77±0.33)% ;pGenesil-1-survivin组(6.33±0.37)%;pGenesil-1-survivin组的凋亡指数是空白对照组的1.78倍(P0.05);pGenesil-1-survivin组survivin mRNA表达的抑制率为63.53%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),而阴性对照pGenesil-1-HK组与空白对照组间无明显差异(P0.05);③G 418成功筛选出各重组质粒稳定转染的CNE2细胞,FCM测得各组稳定转染细胞百分率均达85%以上;稳定转染pGenesil-1-survivin组CNE2细胞survivin mRNA表达抑制率为64.55%,与空白对照组及阴性对照pGenesil-1-HK组比较,差异均有统计学意义(P0.05);FCM及Western-blotting检测survivin蛋白表达抑制率分别为50.29%和51.24%,两结果基本符合,且与空白对照组及阴性对照pGenesil-1-HK组比较,差异均有统计学意义(P0.05);④细胞增殖速度的比较表明,pGenesil-1-survivin组稳定转染细胞的增殖能力明显抑制;⑤克隆形成实验证实survivin shRNA表达载体pGenesil-1-survivin沉默survivin基因表达后,可提高人鼻咽癌CNE2细胞的放射敏感性;⑥pGenesil-1-survivin组移植瘤较空白对照组及阴性质粒pGenesil-1-HK组的平均成瘤时间延迟,平均瘤体积、重量明显下降(P0.05),切片的免疫组化结果进一步证实pGenesil-1-survivin组survivin蛋白表达明显下调。 结论:成功构建survivin shRNA重组质粒pGenesil-1-survivin ;pGenesil-1-survivin重组质粒能在体内、外干扰人鼻咽癌CNE2细胞survivin基因表达,抑制CNE2细胞增殖,提高CNE2细胞放射敏感性;5’-GGACCACCGCATCTCTACA-3’可作为人鼻咽癌CNE2细胞survivin基因的RNA干扰靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】:苏州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R739.63

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李双利,刘俊江,李守宾,李晓强;Survivin在泌尿系统移行细胞癌中的表达及意义[J];承德医学院学报;2004年04期

2 姚红兵,吴爱国,黄宗海;Survivin在结直肠癌中的表达及其临床意义[J];第一军医大学学报;2004年12期

3 刘川;毕峰;杨明妍;罗速;;RNA干扰Survivin基因在人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中的作用[J];中国实验诊断学;2010年08期

4 唐发清,曹亚;Survivin研究进展[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2001年02期

5 施国伟,潘煜海;Survivin与泌尿系肿瘤[J];国外医学.泌尿系统分册;2003年02期

6 刘祺;survivin与消化系统肿瘤[J];中国普通外科杂志;2003年11期

7 徐咏莲,刘少阳,江大琼;宫颈癌中survivin的表达及临床意义[J];肿瘤防治研究;2004年03期

8 李建莎,吴焕明,邢铭友;Survivin,Ki67,PCNA和FⅧRAg在非霍奇金淋巴瘤表达及意义[J];华中科技大学学报(医学版);2004年02期

9 濮德敏,程彦君,黄玲,姚冬梅,辛晓岚;凋亡抑制蛋白Survivin在增生性子宫内膜及子宫内膜癌中的表达[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2004年02期

10 别俊,孙茂盛,孙强明,郑建平,孙雯佳;人survivin的克隆、在大肠杆菌中的表达及活性鉴定[J];第一军医大学学报;2004年08期

相关会议论文 前10条

1 杨华安;;靶向survivin的siRNA干扰膀胱肿瘤EJ细胞的实验研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

2 李大伟;;P糖蛋白、Survivin在喉鳞癌中表达与细胞增殖、凋亡及预后的关系[A];第十次全国中西医结合耳鼻咽喉科学术会议论文汇编[C];2010年

3 包琳;;中医药对肝癌Survivin基因表达影响的研究探讨[A];第五届中国中西医结合围手术期医学研讨会论文集[C];2010年

4 ;A Single Amino Acid Change(Asp 53→Ala53) Converts Survivin from anti-apoptotic to proapoptotic[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年

5 吕喜英;;Survivin与CD105在肺癌组织中的表达与预后的关系[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年

6 王晓娟;戴国仪;曹利民;朱慧芬;张悦;邵静芬;杨敬;沈关心;;Survivin反义核酸促进紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

7 富凯;杨军;汪欣;许波;;对腺样囊性癌(SACC)细胞Survivin基因不同靶序列设计siRNA特异性的筛选[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年

8 王晓娟;赵晓萍;朱慧芬;张悦;邵静芳;杨敬;沈关心;;Survivin反义核酸促进紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡[A];湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集[C];2003年

9 孙慧;马杰;孙玲;刘林湘;邹典斌;刘少君;;Survivin、Bcl-2和VEGF在骨髓增生异常综合征中的表达及其相关性研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

10 张青云;李雪峰;徐建军;王雅明;;尿液中Survivin酶联免疫方法的建立及膀胱癌检测的初步应用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 耿建扩 蔺玉堂;“表达凝血八因子新的重组质粒”成功研制[N];光明日报;2006年

2 严少慰;查游离DNA 肺癌有望早发现[N];健康报;2008年

3 ;丹参能显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞Survivin表达[N];中国中医药报;2005年

4 吴一福;四军医大成功建立HCV多表位基因P815细胞系[N];中国医药报;2006年

5 张中桥;反义Cortactin基因能抑制肝癌细胞转移[N];中国医药报;2006年

6 绍兴县柯桥中学 陶志坚;限制性核酸内切酶相关知识总结[N];学知报;2011年

7 ;抗肝纤维化治疗期待突破[N];中国医药报;2006年

8 王民全;我国畜禽基因工程疫苗技术体系建设进展迅速[N];中国畜牧兽医报;2005年

9 胡宇芬邋通讯员 周文燕;科学探索允许失败[N];湖南日报;2007年

10 吴一福;川大成功建立人新基因PCIA1细胞株[N];中国医药报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 马静;RNA干扰抑制survivin基因表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的实验研究[D];昆明医学院;2010年

2 杨彤涛;凋亡抑制基因survivin在人骨肉瘤组织中的表达及其RNA干涉的初步研究[D];第四军医大学;2004年

3 曹永倩;紫杉醇及survivin反义寡核苷酸对恶性黑色素瘤细胞作用的实验研究[D];山东大学;2010年

4 范海涛;Survivin与VEGF的检测及二者反义寡核苷酸对膀胱癌的治疗研究[D];吉林大学;2010年

5 李红玲;Survivin在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其反义寡核苷酸对淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响[D];第四军医大学;2004年

6 朱晓东;Survivin在紫杉醇抗肿瘤机制中作用及其反义核酸干预胃癌形成的研究[D];复旦大学;2003年

7 闫歌;RNA干扰沉寂survivin表达及其对肝癌细胞凋亡和相关信号传导通路的影响[D];重庆医科大学;2004年

8 史惠蓉;Survivin在卵巢癌中的表达及其反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡的实验研究[D];郑州大学;2004年

9 马爱妞;SurKex诱导survivin基因沉默的分子机理研究[D];上海交通大学;2010年

10 吴荒;Survivin-siRNA抑制视网膜母细胞瘤生长的实验研究[D];吉林大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 王玉;shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究[D];苏州大学;2010年

2 赵杨;Caspase-3 mRNA和Survivin mRNA在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义[D];中国医科大学;2004年

3 王霞;survivin和hTERT在大肠粘膜癌变中表达及其与c-mye关系[D];郑州大学;2004年

4 刘洪翔;Survivin 在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及其与p53、Ki-67表达的关系[D];郑州大学;2004年

5 管睿;Rab、Survivin在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义[D];第二军医大学;2004年

6 赵蒙;Survivin反义寡核苷酸转染对肝门部胆管癌细胞株FRH-0201侵袭作用的实验研究[D];山东大学;2010年

7 张秀梅;Survivin反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响[D];南华大学;2010年

8 孔令慧;非小细胞肺癌中E2F-1、Survivin蛋白表达及与HPV感染的相关性研究[D];华中科技大学;2009年

9 郭文佳;与Survivin调控相关的六个因子在新疆哈萨克族食管癌中的表达研究[D];新疆医科大学;2010年

10 林青;白术内酯Ⅰ对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及促凋亡作用[D];成都中医药大学;2011年



本文编号:2334850

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/2334850.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户cf794***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com