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玻璃体对视网膜色素上皮细胞收缩作用的研究

发布时间:2019-03-08 18:31
【摘要】:目的探讨人玻璃体体外培养对人视网膜色素上皮细胞收缩性的影响。方法低传代(3-5代)人视网膜色素上皮细胞分两组体外培养,一组用普通培养液(含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12)培养,一组用体积分数25%玻璃体培养,应用I型胶原凝胶收缩实验检测收缩力的变化,应用免疫荧光技术检测细胞骨架蛋白F-actin、α-SMA和vinculin的定位染色,应用免疫印迹技术检测α-SMA和vinculin蛋白的表达。结果与普通培养液培养相比,低传代的人视网膜色素上皮细胞玻璃体中培养48 h,胶原凝胶面积为(22 127±2072)像素,明显大于在普通培养液中的凝胶面积(16 084±1154)像素,细胞收缩能力显著下降,两组比较差异有统计学意义(t=4.412,P=0.012)。在普通培养液中,Factin、vinculin主要分布于细胞周边,vinculin形成的粘连斑粗大;而在玻璃体中培养后,Factin重组,在细胞的一端形成扁平伪足结构,vinculin主要分布于细胞扁平伪足端和细胞中央,形成的粘连斑明显变小。玻璃体培养后α-SMA蛋白表达显著下降,与普通培养液相比差异有统计学意义(t=2.845,P=0.047);vinculin蛋白表达无显著变化(t=0.198,P=0.852)。结论玻璃体培养可导致视网膜色素上皮细胞收缩性下降,这一作用可能与α-SMA蛋白表达下调及vinculin重新分布有关。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of human vitreous culture in vitro on the contractility of human retinal pigment epithelial cells (RPE). Methods low passage (3 ~ 5 passages) of human retinal pigment epithelial cells (RPE) were cultured in vitro. The first group was cultured in normal medium (containing 10% fetal bovine serum) and the other group was cultured in 25% vitreous medium. I collagen gel contraction test was used to detect the contractile force, immunofluorescence technique was used to detect the localization staining of cytoskeleton protein, 伪-SMA and vinculin, and the expression of 伪-SMA and vinculin protein was detected by immunoblotting technique. Results compared with the normal culture medium, the collagen gel area of human retinal pigment epithelial cells cultured in low passage medium for 48 hours was (22 127 卤2072) pixels, which was significantly larger than that in normal medium (16 084 卤1154) pixels. The contractility of the cells decreased significantly (t = 4.412, P = 0.012), and there was a significant difference between the two groups (t = 4.412, P = 0.012). In the normal culture medium, Factin,vinculin was mainly distributed around the cells, and the adhesion spots formed by vinculin were thick. After cultured in vitreous body, Factin reconstituted to form a flat pseudopod structure at one end of the cell, and vinculin was mainly distributed in the end and center of the cell, and the adhesion spots became smaller obviously. The expression of 伪-SMA protein decreased significantly after vitreous culture (t = 2.845, P = 0.047, P = 0.852, t = 2.845, P = 0.047, t = 0.198, P = 0.852), and there was no significant difference between the two groups (t = 2.845, P = 0.047). Conclusion vitreous culture can decrease the contractility of retinal pigment epithelial cells, which may be related to the down-regulation of 伪-SMA protein expression and the redistribution of vinculin.
【作者单位】: 中山大学中山眼科中心;中山眼科中心;海南眼科医院;
【基金】:国家自然科学基金资助(编号:81170866) 海南省自然科学基金资助(编号:814367)~~
【分类号】:R774.1

【共引文献】

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本文编号:2437088

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