当前位置:主页 > 医学论文 > 眼科论文 >

缝隙连接蛋白connexin26及connexin30在拟老化大鼠内耳中的表达及调控

发布时间:2019-04-13 18:23
【摘要】:【目的】探讨connexin26基因启动子区异常甲基化与老年性聋的关系。 【方法】D-半乳糖诱导拟老化大鼠模型建立,听性脑干反应(ABR)检测大鼠用药前后听阈,实时定量PCR技术检测线粒体DNA4834bp缺失突变率;实时定量RT-PCR,免疫印迹Western Blot测定用药后Cx26的mRNA和蛋白表达水平;软件分析GJB2基因(编码Cx26蛋白)启动子区;BSP法结合基因测序法检测GJB2基因启动子区甲基化程度;相关分析比较GJB2基因启动子区甲基化程度与Cx26mRNA、蛋白表达水平以及不同剂量组的关系。 【结果】线粒体DNA4834bp缺失突变率随D-半乳糖剂量增大而增加,四组之间ABR阈移差异无统计学意义(P0.05);A、B、C、D四组Cx26mRNA表达水平各组差异无统计学意义(P0.05);Cx26蛋白表达水平D组较A、B组均明显降低,差异有统计学意义(P0.05),其余各组间比较差异无统计学意义(P0.05);Methyl Primer Express软件显示GJB2基因启动子区富含CpG岛;BSP结合基因测序法显示高剂量组内耳组织中GJB2基因启动子区呈高甲基化;GJB2基因甲基化程度与Cx26mRNA、蛋白表达有相关性。 【结论】在拟老化大鼠内耳组织中存在GJB2基因启动子区高甲基化与其低表达相关,推测GJB2基因衰老性甲基化可能参与老年性聋的发生发展。 【目的】研究缝隙连接蛋白connexin30在D-半乳糖诱导的拟老化大鼠内耳中的表达。 【方法】D-半乳糖诱导拟老化大鼠模型建立,听性脑干反应(ABR)检测大鼠用药前后听阈,实时定量PCR技术检测线粒体DNA4834bp缺失突变率;实时定量RT-PCR测定各组用药后Cx30 mRNA的表达水平;免疫印迹Western Blot测定各组用药后Cx30蛋白的表达水平。 【结果】线粒体DNA4834bp缺失突变率随D-半乳糖剂量增大而增加,四组之间ABR阈移差异无统计学意义(P0.05);Cx30mRNA表达水平各组差异无统计学意义(P0.05);Cx30蛋白表达水平B组较A组、D组显著增高,差异有统计学意义(P0.05),其余各组间比较差异无统计学意义(P0.05)。 【结论】Cx30蛋白表达水平在拟老化大鼠内耳组织中存在不同程度的代偿性升高,推测connexin30可能参与老年性聋的发生发展。
[Abstract]:[objective] to investigate the relationship between hypermethylation in promoter region of connexin26 gene and senile deafness. [methods] D-galactose induced aging rat model was established. Auditory brainstem response (ABR) was detected by auditory brainstem response (ABR) and mitochondrial DNA4834bp deletion mutation rate was detected by real-time quantitative PCR. Real-time quantitative RT-PCR, immunoblotting Western Blot was used to detect the expression of mRNA and protein in Cx26, the promoter region of GJB2 gene (encoding Cx26 protein) was analyzed by software, the methylation degree of GJB2 gene promoter region was detected by BSP method combined with gene sequencing. Correlation analysis was used to compare the degree of methylation in the promoter region of GJB2 gene with the expression level of Cx26mRNA, protein as well as the different dose groups. [results] the mutation rate of mitochondrial DNA4834bp deletion increased with the increase of D-galactose dose, and there was no significant difference in ABR threshold shift among the four groups (P0.05). There was no significant difference in the expression of Cx26mRNA among the four groups (P0.05). The expression level of Cx26 protein in group D was significantly lower than that in group A and group B (P0.05), but there was no significant difference among the other groups (P0.05); Methyl Primer Express software showed that the promoter region of GJB2 gene was rich in CpG island). BSP-binding gene sequencing showed that the promoter region of GJB2 gene was hypermethylated in the inner ear of the high dose group, and the methylation degree of GJB2 gene was correlated with the expression of Cx26mRNA, protein. [conclusion] the hypermethylation of the promoter region of GJB2 gene is associated with its low expression in the inner ear of aging rats. It is suggested that aging methylation of GJB2 gene may be involved in the occurrence and development of senile deafness. [objective] to study the expression of gap junction protein (connexin30) in the inner ear of D-galactose-induced aging rats. [methods] D-galactose induced aging rat model was established. Auditory brainstem response (ABR) was detected by auditory brainstem response (ABR) and mitochondrial DNA4834bp deletion mutation rate was detected by real-time quantitative PCR. Real-time quantitative RT-PCR was used to detect the expression level of Cx30 mRNA and Western blot Western Blot was used to detect the expression of Cx30 protein in each group. [results] the mutation rate of mitochondrial DNA4834bp deletion increased with the increase of D-galactose dose, and there was no significant difference in ABR threshold shift among the four groups (P0.05), but there was no significant difference in Cx30mRNA expression level among the four groups (P0.05). The expression level of Cx30 protein in group B was significantly higher than that in group A and group D (P0.05), but there was no significant difference among the other groups (P0.05). [conclusion] the expression level of Cx30 protein in the inner ear tissue of aging rats increased in varying degrees, suggesting that connexin30 may be involved in the occurrence and development of senile deafness.
【学位授予单位】:华中科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R764.43

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈强;毕晓华;徐昕;陶思源;李雪梅;;植物DNA甲基化与体细胞无性系变异的研究进展[J];贵州农业科学;2011年11期

2 ;Codon Usage Biases of Transposable Elements and Host Nuclear Genes in Arabidopsis thaliana and Oryza sativa[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2009年04期

3 郭宝生;刘素恩;王凯辉;耿军义;;表观遗传研究在棉花育种中的应用[J];河北农业科学;2010年04期

4 叶放蕾;刘晓燕;郝少娟;;出生后大鼠耳蜗不同发育阶段connexin26蛋白的表达[J];郑州大学学报(医学版);2009年02期

5 龚萍,印大中;DNA与衰老[J];激光生物学报;2003年01期

6 刘宝;;表观遗传变异与作物遗传改良[J];吉林农业大学学报;2008年04期

7 张美善;于福胜;阎鸿雁;徐克章;;高粱DNA甲基化变异的分子杂交验证[J];吉林农业大学学报;2009年04期

8 王鹏,龚树生;缝隙连接与内耳的关系[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2004年04期

9 袁永一;黄德亮;戴朴;朱庆文;刘新;王国建;李琦;吴柏林;;中国非综合征遗传性聋人群GJB6基因突变分析[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2007年01期

10 黄菲;李雪梅;王文生;傅彬英;;DNA甲基化在植物抗逆反应中的研究进展及其育种应用[J];中国农业科技导报;2013年06期

相关会议论文 前3条

1 邓大君;;CpG甲基化与癌变原理研究[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

2 卜兴江;;从经典遗传到表观遗传——浅谈遗传学教学内容的扩充[A];高等院校遗传学教学改革探索[C];2010年

3 吴焕林;;补肾法抗衰老基因水平机制研究简述及展望[A];第八次全国中西医结合虚证与老年医学学术研讨会论文集[C];2005年

相关博士学位论文 前10条

1 黄俊骏;DNA甲基转移酶基因的表达和花粉母细胞DNA的甲基化[D];兰州大学;2010年

2 熊浩;快速耳蜗损伤小鼠模型的建立及应用[D];华中科技大学;2011年

3 党艳丽;宫颈癌DAP-kinase1基因异常甲基化修饰及其逆转的研究[D];第四军医大学;2004年

4 赵欣欣;玉米亲本自交系及其杂交种的DNA甲基化水平和模式的遗传和变异研究[D];东北师范大学;2006年

5 刘秉胜;hsp90β基因在Jurkat细胞中表达调控机理的研究[D];中国协和医科大学;2000年

6 洪柳;i*柑多倍体的分离以及脐橙品种的遗传多样性分析[D];华中农业大学;2006年

7 袁永一;中国人重度—极重度耳聋分子流行病学及致病机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

8 赵云雷;棉花杂交种与亲本间DNA胞嘧啶甲基化及其基因差异表达分析[D];华中农业大学;2007年

9 张美善;高梁叶片和胚乳DNA甲基化水平和模式的遗传与变异研究[D];东北师范大学;2007年

10 严茂军;结直肠癌中黑色素瘤抗原基因表达及启动子去甲基化状态的研究[D];广西医科大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 李炫丽;ms2Bnap同源序列在萝卜—芥蓝异源四倍体中的克隆及表观遗传变异分析[D];华中农业大学;2010年

2 张红;Cx29、Cx30在出生后大鼠耳蜗不同发育阶段的表达和意义[D];郑州大学;2010年

3 茹炳华;哺乳动物GJB6的分子克隆和进化分析[D];华东师范大学;2011年

4 王娜;糖尿病性聋发病机制与Cx26、Cx30关系的探讨性研究[D];河北医科大学;2011年

5 李晓;卵巢癌MTDH基因变异的筛选及其与临床病理学关系的研究[D];山东大学;2011年

6 周yN;基于相对密码子频率的芜菁花叶病毒基因序列的进化分析[D];湖南大学;2009年

7 赵立东;豚鼠耳蜗中ATP与NO/cGMP途径关系的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年

8 张一;人乳头瘤病毒11型全基因组转基因小鼠基因元件的设计与构建[D];西南大学;2007年

9 于晓明;玉米自交系亲本及其杂交种的体细胞克隆变异研究[D];东北师范大学;2007年

10 李明锟;人类18号染色体同质段的进化研究[D];西北农林科技大学;2007年



本文编号:2457816

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/2457816.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户0a7a5***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com