透明质酸修饰的核壳纳米粒对视网膜色素上皮细胞基因转染效率的研究

发布时间：2019-04-17 21:18

【摘要】：本文旨在制备透明质酸(hyaluronic acid,HA)修饰的核壳纳米粒(pHA-LCS-NPs)作为基因药物传递载体,并对视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,ARPE-19)基因转染效率进行研究。采用薄膜分散水化-挤膜法制备核壳纳米粒(LCS-NPs),通过HA与二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleoyl phosphatidylethanolamine,DOPE)发生酰胺反应,对脂质膜进行修饰,制得pHA-LCS-NPs。本研究对纳米粒微观形态、粒径和zeta电位进行考察;采用XTT法测定载体的细胞毒性;以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,pEGFP)基因为报告基因,探讨不同含量HA修饰的pHA-LCS-NPs对ARPE-19细胞基因转染效率的影响。结果表明:纳米粒呈现清晰的核壳结构,平均粒径为(214.9±7.2)nm,zeta电位为(-35±3.7)mV;pHA-LCS-NPs组24 h基因的累积释放率低于30%;48 h的细胞转染效率是壳聚糖纳米粒(CS-NPs)组的1.81倍、裸质粒组的3.75倍,且无明显细胞毒性。以上结果显示,pHA-LCS-NPs有潜力成为一种高效低毒的非病毒型基因药物传递载体。
[Abstract]:The aim of this study was to prepare hyaluronic acid (hyaluronic acid,HA) modified nucleocapsid nanoparticles (pHA-LCS-NPs) as gene drug delivery vectors and to study the transfection efficiency of (human retinal pigment epithelium,ARPE-19 gene in retinal pigment epithelial cells (RPE). Core-shell nanoparticles (LCS-NPs) were prepared by thin film dispersion hydration-extrusion method. The lipid membranes were modified by the reaction of HA with dioleyl phosphatidylethanolamine (dioleoyl phosphatidylethanolamine,DOPE) to prepare pHA-LCS-NPs.. In this study, the micromorphology, particle size and zeta potential of the nanoparticles were investigated, and the cytotoxicity of the carriers was determined by XTT method. Green fluorescent protein (green fluorescent protein,pEGFP) gene was used as reporter gene to investigate the effect of pHA-LCS-NPs modified with different content of HA on gene transfection efficiency of ARPE-19 cells. The results showed that the nucleocapsid structure of the nanoparticles was clear, the average particle size was (214.9 卤7.2) nm,zeta potential was (- 35 卤3.7) mV;pHA-LCS-NPs, the cumulative release rate of 24 h gene was less than 30% in the group of (- 35 卤3.7) mV;pHA-LCS-NPs. The transfection efficiency of 48 h was 1.81 times higher than that of chitosan nanoparticles (CS-NPs) group and 3.75 times of that of naked plasmid group, and there was no obvious cytotoxicity. These results suggest that pHA-LCS-NPs has the potential to become a non-viral gene drug delivery vector with high efficiency and low toxicity.
【作者单位】： 中国药科大学;中国科学院上海药物研究所;唐山职业技术学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81102387) 上海市自然科学基金资助项目(11ZR1444700)
【分类号】：R774.1

【共引文献】

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