恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的实验研究

发布时间：2019-08-05 12:55

【摘要】： 目的利用恒河猴血管内皮细胞(RMVECs)移植替代角膜内皮细胞(CECs),通过观察移植到去除后弹力层的角膜内表面的血管内皮细胞形态、功能的改变,探索血管内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤的可行性。 方法体外培养增殖RMVECs并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记。将恒河猴4只随机分为两组:实验组(3只)、对照组(1只)。实验组:将体外培养的Brdu标记的RMVECs利用离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面后缝回植床;对照组:将撕除后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床。术后观察各组角膜植片透明情况,术前、术后7、14、21、30、45、60、90天分别抽取各组房水,用ELISA法测定房水中血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度。术后30、60、90天分别摘取术眼,行病理切片、抗Brdu单克隆抗体免疫组化染色、扫描电镜及透射电镜观察RMVECs在角膜植片内表面的分布及细胞超微形态结构。 结果角膜透明度:在实验观察期内(3个月),实验组角膜植片比对照组角膜植片有较好的透明性,未出现新生血管及大泡性角膜病变。病理切片:实验组角膜内表面可见细胞层,抗Brdu单克隆抗体免疫组化染色阳性,示该细胞为培养的Brdu标记的血管内皮细胞;对照组角膜内表面未见细胞样结构。扫描电镜:实验组角膜植片内表面可见RMVECs分布均匀,生长良好,呈不规则多边形,表面可见微绒毛,RMVECs间可见少量白细胞,小梁网处部分细胞碎片聚集;对照组角膜内表面呈纤维物质样,未见细胞生长。透射电镜:培养的RMVECs及实验组角膜内表面的RMVECs呈不规则扁圆状,细胞间大量桥粒链接,胞质内细胞器丰富,可见特征性WP小体,提示其具备活体血管内皮细胞的特征与活性,对照组角膜内表面未见细胞结构。房水VEGF浓度:实验组和对照组术后1周VEGF浓度差别无统计学意义,术后2、3、4、6、8、12周差别具有统计学意义,相应时间点实验组显著高于对照组。 结论恒河猴血管内皮细胞能够在撕除后弹力层的角膜内表面生长,其超微结构与活体细胞相似,细胞器丰富,细胞活力好,能在一定程度上发挥屏障作用及主动液泵功能,维持角膜的脱水状态和透明性。房水VEGF浓度在术后1月内持续升高,之后稳定在一较高水平。提示利用血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的功能有可能成为治疗角膜内皮损伤的一种新思路。
【图文】：

图27图282、RMVECs移植后，角膜植片透射电镜观察RMvECS移植到角膜内表面后，呈长梭形生长，与角膜基质紧密贴附，相邻的RMVECS细胞之间可见桥粒连接。细胞核亦为长梭形，染色质均匀分布。细胞质内可见大量内质网、高尔基复合体、溶酶体等细胞器，但与移植前相比较，细胞核及线粒体肿胀，，内质网扩张。胞质内可见内皮细胞特有的超微结构:Weibel一Palade小体(WPBs)(t)。见29、30:

03、对照组角膜内表面透射电镜观察
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R779.6

【参考文献】

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本文编号：2523135