FDM豚鼠RPE-脉络膜RA信号通路的研究

发布时间：2019-09-04 16:12

【摘要】：研究目的建立早期形觉剥夺性近视(form-deprivation myopia, FDM)动物模型,检测豚鼠视网膜色素上皮-脉络膜中转化生长因子β2 (transforming growth factor-beta2, TGF-β2)及活化蛋白-1 (activator protein-1, AP-1)的水平;形觉剥夺同时分别给予AP-1的抑制剂姜黄素和视黄酸受体β(retinoic acid receptorβ, RARβ)特异性抑制剂LE540,比较不同处理对屈光状态的影响,并检测视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2和AP-1的水平,探讨TGF-β2和AP-1在形觉剥夺性近视豚鼠视网膜色素上皮-脉络膜中的作用及其与视磺酸(retinoic acid, RA)信号传递过程的关系。方法第一部分：同批次3周龄豚鼠12只,采用戴头套法遮盖左眼,右眼为自身对照眼。饲养至21天作为形觉剥夺动物模型。观测指标：1.实验前后均测量屈光度,实验结束后摘除眼球,测量眼轴长；2.应用ELISA法检测视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2含量,western blotting方法检测视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1含量的变化。第二部分：另选同种豚鼠40只,随机分为4组,Ⅰ组6只,为正常对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组各12只。Ⅱ组为实验对照组,左眼球后注射0.1%DMSO0.1ml;Ⅲ组左眼球后注射0.1m(1.5g/L)姜黄素；Ⅳ组左眼球后注射0.1ml (0.1 g/L) LE540;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均隔日给药一次,共3次,并遮盖左眼至第21天。右眼为自身对照眼。观测指标同第一部分。计量资料数据以x±s表示,采用SPSS16.0统计学软件进行统计学处理,并进行正态分布及Levene方差齐性检验后行t检验和方差分析。结果第一部分：12只动物实验眼诱导出明显的相对近视,且与自身对照眼比较差异有统计学意义(t=-0.575,P=0.001)。实验眼眼轴均长于自身对照眼(t=-4.920,P=0.000)。实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2水平较自身对照眼明显降低(t=-4.933, P=0.004), Western blotting所得c-Fos和GAPDH的灰度图显示,实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1活性较自身对照眼减低(t=-2.832,P=0.037)。第二部分：实验干预后Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ组的实验眼形成相对近视,三组左右眼屈光度差异均有显著统计学意义(P0.05)。Ⅲ组和Ⅳ组之间实验眼实验前后屈光度变化差异有统计学意义(P0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组干预后左右眼眼轴长度差异均有统计学意义(P0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2含量较自身对照眼明显降低(P0.05)；Ⅰ组实验后双眼视网膜色素上皮-脉络膜中的TGF-β2含量与自身对照眼相比差异无统计学意义(P0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组实验后实验眼视网膜色素上皮-脉络膜中的AP-1活性表达与自身对照眼相比均明显降低(P0.05)；Ⅰ组实验后双眼视网膜色素上皮-脉络膜中的AP-1活性表达与自身对照眼相比差异无统计学意义(P0.05)。结论豚鼠形觉剥夺可导致近视发生；豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中AP-1活性和TGF-β2表达下调；AP-1抑制剂姜黄素的使用可以影响豚鼠形觉剥夺性近视的形成作用,豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中TGF-β2表达受AP-1活性的影响；RARβ抑制剂LE540的使用可以影响豚鼠早期形觉剥夺性近视的形成作用；豚鼠早期形觉剥夺眼视网膜色素上皮-脉络膜中RARβ可以调控AP-1和TGF-β2的活性表达,AP-1和TGF-β2可能是调控豚鼠FDM形成的RA信号通路的重要因子,RA--RARp--AP-1--TGF-β2的视磺酸信号通路可能是调控豚鼠FDM形成的重要通路之一。
【图文】：

模型制作,豚鼠

实验眼均为左眼，右眼为自身对照眼。形觉剥夺均采用6号同色气球(河北雄县乳胶厂)于豚鼠口鼻、双耳及非实验眼处开窗，制成大小合适的头套遮盖左眼，颈部以胶带固定防止脱落，，饲养至21天(见图1)，期间动物处于活动状态。于预计时间点用10%水合氯醛过度麻醉处死。实验过程中动物的使用遵循《实验动物管理条例》。图1豚鼠形觉剥夺性近视模型制作1.1.3实验方法1.1.3.1屈光度的测量12只豚鼠实验干预前后均行屈光度测量，本实验采用单盲法，由同一名有多年验光经验的视光师检影。动物处于安静状态下，结膜囊内点l%复方托毗咔胺滴眼液共3次，每次间隔 5min，30min后于暗室内行视网膜检影。动物头部位置固定，工作距离为0.50m，以0.25D间隔在水平及垂直子午线上带状光检影

头部位置,滴眼液,工作距离,子午线

胺滴眼液共3次，每次间隔 5min，30min后于暗室内行视网膜检影。动物头部位置固定，工作距离为0.50m，以0.25D间隔在水平及垂直子午线上带状光检影，散光以半量计入球镜(见图2)。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R778.11

【引证文献】