骨桥蛋白与整合素在糖尿病大鼠视网膜的表达研究
本文关键词:骨桥蛋白与整合素在糖尿病大鼠视网膜的表达研究,由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】:目的:该研究主要目的在于通过对大鼠左下腹腔注射STZ建立SD大鼠糖尿病视网膜病变的模型,讨论当糖尿病大鼠发生视网膜病变时,骨桥蛋白、整合素αvβ3的表达水平,进而初步讨论其在DR病变进程中的作用和机理。方法:选取出生6周大小健康的清洁级Sprague Dawley大鼠60只,建立类似人类I型糖尿病模型。每只大鼠入选时均排除其他眼科疾病,称重体重约130至150g,实验整个进程时,常规实验室大鼠饲料喂养20周,采用随机分组法将15只列为普通对照组(I组),对其左下腹腔皮下注射等量柠檬酸缓冲液。另外45只大鼠同样采用随机分组法均分为3组,每组15只,4组大鼠称重评估健康状况后均适应性喂养一周,注射STZ前禁食不禁水约12小时,按照55mg/kg的剂量配制10%STZ溶液,避光保存,半小时内在大鼠左下腹腔内注射。氯霉素软膏涂抹注射部位防止感染,注射后恢复常规禁食,约72小时后于大鼠尾静脉采血测血糖。大鼠进食后血糖浓度始终保持在16.7mmol/L则判定为达标糖尿病大鼠模型,此时大鼠表现为明显多尿多饮。分组中II组常规喂养12周,III组常规喂养16周,IV组常规喂养20周。20周后采用全身灌注法固定眼球,摘取双眼后送检免疫组化,检测骨桥蛋白、αvβ3的阳性表达水平。结果:(1)体重及空腹血糖变化比较:较之II、III、IV组,I组大鼠体重明显增高(P0.05),差异有统计学意义;糖尿病大鼠三组之间两两之间体重变化无统计学意义。较之II、III、IV组,I组大鼠血糖无明显增高(P0.05),差异有统计学意义,糖尿病大鼠三组之间两两之间血糖变化无统计学意义。(2)免疫组化法检查:结果显示在糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的胞浆中骨桥蛋白和αVβ3的表达呈阳性,阳性细胞的胞浆为淡黄色或棕黄色,二者积分光密度测定值经过统计学分析存在明显差异性(P0.01),实验组阳性率明显高于对照组。骨桥蛋白、αvβ3在45只实验组大鼠中的阳性率分别为81%、72%。(3)HE染色病理学切片示:糖尿病大鼠(II组、III组及IV组)视网膜切片可见大量突破内界膜的内皮细胞核,相比空白对照组大鼠有明显的统计学差异性(P0.05)。结论:(1)糖尿病组大鼠12周时视网膜已出现明显改变:视网膜较之对照组大鼠明显厚度减少,血管旁细胞罕见。(2)骨桥蛋白、αvβ3在糖尿病组大鼠视网膜的神经节细胞层表达水平明显上调,且随病程时间推移递增,这一结果表明二者可能在DR病程的进展中起着重要作用。(3)骨桥蛋白的阳性率和αvβ3具有一致性,骨桥蛋白表达上调可能促进αvβ3的表达增加。
【关键词】:糖尿病视网膜病变 骨桥蛋白 整合素αvβ3
【学位授予单位】:皖南医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R587.2;R774.1
【目录】:
- 中英文缩略词对照表5-9
- 摘要9-11
- Abstract11-13
- 前言13-15
- 研究材料与方法15-21
- 1 材料15-17
- 1.1 实验对象15
- 1.2 实验分组15
- 1.3 主要试剂15
- 1.4 主要溶液配制15-16
- 1.4.1 0.1mmol/L柠檬酸缓冲液15-16
- 1.4.2 1%STZ溶液16
- 1.4.3 柠檬酸钠缓冲液(PBS)16
- 1.4.4 4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液16
- 1.5 实验仪器16-17
- 1.5.1 操作器械及物品16
- 1.5.2 实验仪器16-17
- 2 方法17-21
- 2.1 动物模型建立17
- 2.1.1 糖尿病组17
- 2.1.2 空白对照组17
- 2.2 完整摘取眼球17-18
- 2.3 组织蜡块的制备18
- 2.4 修正蜡块18
- 2.5 切片18
- 2.6 HE染色18
- 2.7 免疫组化染色法18-19
- 2.8 视网膜骨桥蛋白、整合素αVβ3表达的半定量测定19
- 2.9 数据处理19-21
- 结果21-27
- 3.1 大鼠的一般情况21-22
- 3.1.1 一般情况21
- 3.1.2 大鼠血糖测试情况21
- 3.1.3 糖尿病大鼠造模成功率21
- 3.1.4 各组实验大鼠存活情况21
- 3.1.5 实验前各组大鼠的体重和空腹血糖21-22
- 3.1.6 实验结束时各组大鼠的体重和空腹血糖22
- 3.2 形态学观察22
- 3.3 免疫组织化学染色法22-24
- 3.3.1 各组大鼠视网膜骨桥蛋白免疫组化染色结果22-23
- 3.3.2 各组大鼠视网膜整合素αVβ3免疫组化染色结果23-24
- 3.4 免疫组化结果分析24-27
- 3.4.1 骨桥蛋白24
- 3.4.2 整合素αVβ324-27
- 讨论27-35
- 4.1 糖尿病视网膜病变27
- 4.2 动物选择及模型建立27-30
- 4.3 骨桥蛋白(OPN)与整合素αVβ3与糖尿病视网膜病变30-35
- 4.3.1 OPN与整合素αVβ3的一般生物学特性30-32
- 4.3.1.1 OPN的一般生物学特性30-31
- 4.3.1.2 整合素αvβ3的一般生物学特性31-32
- 4.3.2 OPN与整合素αVβ3在糖尿病视网膜病变中的关系32-35
- 结论35-36
- 参考文献36-41
- 综述41-63
- 参考文献55-63
- 作者简介及读研期间主要科研成果63-64
- 致谢64
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