肽聚糖对实验性自身免疫性葡萄膜炎辅助性T细胞17的影响

发布时间：2017-03-18 14:04

  本文关键词：肽聚糖对实验性自身免疫性葡萄膜炎辅助性T细胞17的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的 葡萄膜炎是一大类累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管、视乳头及玻璃体的眼病,常导致眼组织的严重破坏以致视功能的显著下降或丧失。人类葡萄膜炎是一类种类繁多、病因复杂的疾病。虽然感染、外伤等多种因素均可引起葡萄膜炎,但多数观点认为,自身免疫紊乱所致的葡萄膜炎为最常见和最重要的类型,其中辅助性T细胞17在自身免疫性葡萄膜炎的发病机制中起到重要作用。有研究发现,TLRs与葡萄膜炎的的发生有关,并且只有TLR2基因与白塞氏病的易感性关系密切。在近年来研究发现,Toll样受体2在自身免疫性疾病的发病机制中起到关键的致病作用。本研究旨在探讨肽聚糖作为Toll样受体2的配体对树突状细胞分泌促炎性因子的影响,分析To11样受体2对实验性自身免疫性葡萄膜炎中辅助性T细胞17调控的机制,从而进一步阐明白身免疫性葡萄膜炎的发病机制。 方法 1、树突状细胞的培养,鉴定C57BL/6小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cells, DCs)。 2、在小鼠骨髓细胞诱导树突状细胞分化的第6天将DCs分为对照组与实验组,实验组加入PGN刺激,对照组加入等量无菌磷酸缓冲盐溶液,培养24h后利用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测2组培养细胞中Th17细胞分化相关的细胞因子IL-23、肿瘤坏死因子(TNF)-α (TNF-α)、IL-6、IL-1β mRNA相对表达量。 3、建立EAU模型：利用光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)1-20多肽片段与含有结合分枝杆菌H37RA的弗氏完全佐剂(Complete Freund's adjuvant, CFA)等体积混合并充分乳化,单侧后肢足垫和躯干部皮下注射,免疫C57BL/6小鼠。 4、分离IRBP1-20特异性T细胞并分别与两组树突状细胞共培养：免疫13天分离EAU模型鼠脾脏和淋巴结的IRBPl-20特异的T细胞与经PGN处理或未处理的树突状细胞共培养,收集共培养后2d的IRBP1-20特异的T细胞,实时荧光RT-PCR检测两组维甲酸受体相关孤儿受体(ROR) γt (RORγt)、IL-17、T-bet、γ干扰素(IFN-γ)mRNA相对表达量； 5、收集共培养后2、5、7d的细胞分别进行流式细胞仪分析,观察Th17、Thl细胞的变化。 6、将培养至第6天的DCs随机分为对照组,PGN处理组PGN+SB203580组,并分别与IRBP1-20特异性T细胞共培养,‘并于共培养的第7天,收集T细胞,流式细胞仪分析Th17和Th1的变化。 7、将培养至第6天的DCs加入PGN刺激后,分别于0min、15min、30min、1hr收集树突状细胞,western blot检测p-p38。 结果 1、成功诱导纯化并鉴定小鼠树突状细胞。 2、实时荧光RT-PCR检测结果显示,实验组DCs经PGN刺激后IL-23、IL-1βIL-6、TNF-α mRNA相对表达量较对照组显著升高,差异有统计学意义(t=-14.363、-5.627、-3.85、-28.151; P0.05)。 3、实时荧光RT-PCR检测结果显示实验组RORγt、IL-17mRNA相对表达量较对照组升高(t=-5.601、-19.76；P0.05),而T-bet、IFN-γ mRNA相对表达量变化不大。 4、流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,实验组的DCs与T细胞共培养后2d、5d、7d, IL-17+细胞的百分比升高(t=-2.944、-3.03、-4.81; P0.05)而IFN γ+细胞的比例变化不大(t=-I.25,-0.18,-2.16;P0.05) 5、流式细胞仪检测结果显示,SB203580预处理组与单纯PGN处理组相比,IL-17+细胞的百分比降低。封闭p38MAPK通路抑制了PGN对Th17细胞的促进作用。 6、western blot结果显示经PGN刺激后DCs表达p-p38增多。 结论 在体外,PGN能够刺激DCs分泌IL-23、IL-1β、IL-6、TNF-α等与Th17细胞分化相关的细胞因子,促进EAU中Th17细胞的分化和增生。树突状细胞p38通路与PGN对Th17细胞的促进作用密切相关。
【关键词】：实验性自身免疫性葡萄膜炎 Toll样受体2 抗原特异性T细胞 Thl7细胞 树突状细胞
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R773.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• ~.略语/符号说明11-12
• 前言12-18
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-18
• 1.1 实验动物与材料18-20
• 1.1.1 实验动物18
• 1.1.2 实验所用的主要仪器和设备18-19
• 1.1.3 主要试剂及溶液配制19-20
• 1.2 方法20-32
• 1.2.1 树突状细胞的培养,鉴定C57BL/6小鼠骨髓树突状细胞20-21
• 1.2.2 树突状细胞的鉴定21
• 1.2.3 树突状细胞总RNA提取21-22
• 1.2.4 树突状细胞总RNA逆转录22
• 1.2.5 Quantitative real-time PCR(qPCR)实时定量PCR22-24
• 1.2.6 建立C57BL/6小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎动物模型24
• 1.2.7 在免疫后的第6天,诱导培养树突状细胞24-25
• 1.2.8 分离IRBP1-20特异性T细胞25
• 1.2.9 IRBP1-20特异性T细胞与树突状细胞共培养25-26
• 1.2.10 实时定量RT-qPCR检测共培养的T淋巴细胞基因变化26-27
• 1.2.11 流式细胞术分析Th1与Th17细胞的比例27
• 1.2.12 流式细胞仪分析p38抑制剂SB203580对Th17的影响27
• 1.2.13 western blot检测P-P3827-32
• 1.2.14 统计学处理32
• 1.3 结果32-39
• 1.3.1 小鼠骨髓来源树突状细胞的培养与鉴定32
• 1.3.2 树突状细胞分泌细胞因子检测结果32-34
• 1.3.3 实时定量RT-qPCR检测共培养的T淋巴细胞基因变化34-35
• 1.3.4 流式细胞仪检测共培养的T淋巴细胞中Th1与Th17细胞的比例35-37
• 1.3.5 抑制p38使Th17细胞下调37-38
• 1.3.6 western blot检测经PGN刺激后树突状细胞中P-P38的表达情况38-39
• 1.4 讨论39-43
• 结论43-44
• 参考文献44-49
• 发表论文和参加科研情况说明49-50
• 综述50-66
• 综述参考文献58-66
• 致谢66

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10 重庆医科大学附属第一医院眼科教授 杨培增　本报记者 魏平 整理;葡萄膜炎：诊断细化流程 治疗激素当先[N];医药经济报;2011年

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8 原莉莉;诱导免疫耐受治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎[D];天津医科大学;2005年

9 杨白冰;环孢素联合糖皮质激素治疗特发性全葡萄膜炎的临床应用研究[D];郑州大学;2011年

10 刘姣;葡萄膜炎患者心理状况，视力以及健康相关生活质量研究[D];重庆医科大学;2011年

  本文关键词：肽聚糖对实验性自身免疫性葡萄膜炎辅助性T细胞17的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

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