慢性间歇性低氧对HDL代谢的影响及相关机制的研究

发布时间：2020-01-31 22:40

【摘要】：第一部分间歇低氧对大鼠血清HDL及肝脏PPARa. ABCA1表达的影响 目的： 本实验旨在动物水平上模拟体内间歇低氧状态,通过对雄性SD大鼠的慢性间歇性低氧及复氧干预,探讨间歇性低氧对大鼠血脂的影响,在组织水平上,检测肝脏HDL代谢相关代谢指标PPARα、ABCA1的变化,观察目的指标在不同间歇缺氧浓度及对应复氧组中表达的差异,进而了解低氧与脂质代谢的关系,初步探讨复氧后上述指标恢复情况及可能机制,寻找对间歇低氧刺激敏感的靶指标,为疾病的早期诊断、早期干预提供新的思路及实验依据。 方法： 建立间歇低氧大鼠模型并随机分为6组,即对照3周组,对照6周组,10%间歇低氧3周(10%CIH-3)组,5%间歇低氧3周(5%CIH-3)组,10%复氧-6组即给予10%CIH处理3周后转为常氧恢复3周,5%复氧-6组即给予5%CIH处理3周后转为常氧恢复3周共6组,比较各组血脂有无差异；并观察各组大鼠肝组织形态改变,比较各组大鼠肝脏PPARα、ABCA1表达有无差异(免疫组化法)。 结果： 一、血脂分析： 1、间歇低氧组大鼠血CHOL水平较对照组明显升高(10%CIH-3周:2.46±0.14VS2.09±0.18mmol/L;5%CIH-3周2.26±0.10vs2.09±0.18mmol/L;P0.01);复氧组大鼠血CHOL水平较CIH组明显降低(10%复氧-6周VS10%CIH-3:1.63±0.05VS2.46±0.14mmol/L;5%复氧-6周VS5%CIH-3:1.70±0.22VS2.26±0.10mmol/L;P0.01);10%复氧-6组大鼠血CHOL较对照-6组(1.63±0.05VS1.67±0.24mmol/L, P0.05)无显著性差异,认为恢复至常氧水平；5%复氧-6组大鼠血CHOL与对照-6组无显著性差异(1.70±0.22VS1.67±0.24mniol/L, P0.05),认为恢复至常氧水平。 2、与对照组大鼠比较,各组间TG无统计学差异(p0.05)； 3、10%CIH-3组大鼠血LDL-C水平较对照-3组明显升高(0.33±0.06VS0.23±0.05mmol/L, P0.01);5%CIH-3组大鼠血LDL-C水平较对照-3组明显升高(0.35±0.03VS0.26±0.05mmol/L,P0.01); 复氧组大鼠血LDL-C水平较CIH组明显降低(10%复氧-6周VS10%CIH-3:0.24±0.02VS0.33±0.06mmol/L;5%复氧-6周VS5%CIH-3:0.19±0.03VS0.35±0.03mmol/L; P0.01); 10%复氧-6组大鼠血LDL-C较对照-6组升高但无显著性差异,认为恢复至常氧水平(0.24±0.02VS0.20±0.03mmol/L, P0.01);5%复氧-6组大鼠血LDL-C较对照-6组升高但无显著性差异,认为恢复至常氧水平(0.19±0.03VS0.20±0.03mmol/L, P0.01)o 4、间歇低氧组大鼠血HDL-C水平对照组明显降低(10%CIH-3:0.40±0.05VS0.53±0.05mmol/L;5%CIH-3:0.34±0.04VS0.53±0.06mmol/L,P0.01);复氧组大鼠血HDL-C水平较CIH组明显升高(10%复氧-6周VS10%CIH-3:0.52±0.04VS0.40±0.05mmol/L;5%复氧-6周VS5%CIH-3:0.48±0.04VS0.34±0.04mmol/L; P0.01)；10%复氧-6组大鼠血HDL-C较对照-6组(0.52±0.04VS0.49±0.06mmol/L, p0.05)无显著性差异,认为恢复至常氧水平；5%复氧-6组大鼠血HDL-C与对照-6组组无显著性差异(0.48土0.04VS0.49±0.05mniol/L, P0.05),认为恢复至常氧水平。 三、PPARα、ABCA1免疫组化结果： 1、间歇低氧组大鼠PPARα较对照组明显降低(10%CIH-3:132.85±4.56VS178.553±2.63;5%CIH-3:102.40±4.06VS180.42±2.58,P0.01);复氧组大鼠PPARα较CIH组明显升高(10%复氧-6周VS10%CIH-3:175.23±5.34VS132.85±4.56;5%复氧-6周VS5%CIH-3:168.70±6.12VS102.40±4.06; P0.01);10%复氧-6组大鼠PPARα较对照-6组(175.23±5.34VS180.42±2.58, p0.05)无显著性差异,认为恢复至常氧水平；5%复氧-6组大鼠PPARα较对照-6组无显著性差异(168.70±6.12VS180.42±2.58,P0.05),认为恢复至常氧水平。 2、间歇低氧组大鼠ABCA1较对照组明显降低(10%CIH-3:202.85±12.50VS318.62±13.60;5%CIH-3:172.24±9.08VS330.42±13.57,P0.01);复氧组大鼠ABCA1较CIH组明显升高(10%复氧-6周VS10%CIH-3:305.22±15.24VS202.85±12.50; P0.01;5%复氧-6周VS5%CIH-3:301.72±12.22VS172.24±9.08; P0.01)；10%复氧-6组大鼠ABCA1较对照-6组(305.22±15.24VS330.42±13.57(p0.05)无显著性差异,认为恢复至常氧水平；5%复氧-6组大鼠ABCA1与对照-6组无显著性差异(301.72士12.22VS330.42±13.57,P0.05),认为恢复至常氧水平。 结论： 1、OSAHS模式的CIH大鼠模型可致血清LDL-C和CHOL升高、HDL-C降低,而TG的结果分析无统计学意义； 2、复氧干预后可有效提高HDL-C水平； 3、OSAHS模式的CIH大鼠模型可能通过PPARa-ABCA1通路导致HDL紊乱,复氧3周干预治疗可有效使大鼠PPARα、ABCA1表达水平基本恢复至常氧水平,提示CIH只要及时得到干预治疗就有可能逆转其造成的肝脏PPARα、ABCA1改变,从而逆转血脂紊乱。 第二部分间歇低氧对HepG2细胞中HDL相关蛋白PPARα、 ABCA1、apoM表达的影响及机制研究 目的： 本研究拟通过建立HepG2细胞慢性间歇低氧模型,用分子生物学方法从细胞学水平探讨不同浓度OSAHS模式CIH环境下HepG2细胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA及蛋白的变化,探讨OSAHS模式慢性间歇性低氧对HDL代谢的上游PPARa, ABCA1, apoM调控途径的可能的影响,从而探讨CIH相关HDL代谢紊乱的发病机制,为临床预防及治疗OSAHS与高脂血症提供理论基础。 方法： 建立间歇低氧培养HepG2细胞模型,设立三组,分别为对照(A组)、10%间歇低氧(B组)、5%间歇低氧(C组)3组。通过光镜观察细胞生长形态,油红0染色法检测细胞脂变率。采用RT-PCR检测各组细胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表达；并用蛋白印迹法检测各组PPARα、ABCA1及apoM蛋白表达。 结果： 1、间歇低氧培养下HepG2细胞生长速度明显缓慢,出现脂变,与间歇低氧程度相关；10%间歇低氧(B组)、5%间歇低氧(C组)细胞存活率分别为(80.1士2.1)%、(48.3±2.3)%.与A组相比,B、C细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P0.01),两组间歇低氧组间有统计学差异(P0.05)。间歇低氧以浓度依赖性方式抑制HepG2细胞生长,HepG2细胞存活率与间歇低氧严重程度相关。 2、RT-PCR显示B、C组细胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表达较A组减少(p0.01),且C组低于B组(p0.05)。 3、Western blot检测显示B、C组HepG2的PPARα、ABCA1及apoM蛋白表达降低(p0.01)；且C组低于B组(p0.01)。 结论： OSAHS模式间歇低氧诱导HepG2细胞脂肪变性；OSAHS模式间歇低氧可能通过诱导HepG2细胞PPARα、ABCA1、apoM表达的减少参与HDL代谢紊乱。 第三部分OSAHS患者血清apoM、apoA5水平与HDL关系及nCPAP干预研究 目的： 本研究拟观察阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者的血清HDL与血清apoM、apoA5水平以及nCPAP治疗干预作用,OSAHS相关脂代谢紊乱的进一步深入研究以及诊治提供新的理论方向。 方法： 1、随机选择18例确诊的中、重度OSAHS患者和18例性别、年龄、体重指数、疾病分布相匹配的对照者。检测并分析比较两组。血脂及血清apoM、apoA5水平有无差异。通过对18例中、重度OSAHS患者进行nCPAP治疗3月,比较治疗前后患者上述指标有无差异。 结果： 1、OSAHS组患者的AHI和血清TG水平高于对照组(P0.05),HDL-C、apoM、apoA5水平低于对照组(P0.05),夜间平均Sa02、最低Sa02明显低于对照者(P0.05),但两组CHOL、LDL-C无差异性(P0.05)； 2、所有研究对象血清TG与AHI呈正相关,]HDL-C、apoM、apoA5与AHI呈负相关；所有研究对象血清TG与夜间平均Sa02、最低Sa02呈负相关,而HDL-C、apoM、apoA5与夜间平均Sa02、最低Sa02呈正相关(P0.05)； 3、ApoM与apoA5与HDL-C均呈正相关(P0.001); ApoM与apoA5之间呈正相关(r=0.536,P0.001)。多元逐步回归分析显示apoM与平均Sa02有良好的相关性(P0.01),ApoA5与平均Sa02有良好的相关性(P0.01)。 4、中、重度OSAHS患者nCPAP治疗3月后血清TG水平均较前明显降低(P0.05), HDL-C、apoM、apoA5水平均较前明显增高(P0.05)。 结论： 1、OSAHS患者HDL-C明显降低。2、OSAHS患者血清apoM、 apoA5水平降低,与OSAHS严重程度及HDL-C水平相关。3、nCPAP治疗增加OSAHS患者血清apoM、apoA5及HDL-C水平。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R766

【参考文献】

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本文编号：2575187