COX-2选择性抑制剂诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及自噬的体外研究

发布时间：2020-02-06 17:41

【摘要】：目的初步探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人喉癌Hep-2细胞诱导凋亡的作用及可能的机制并观察其引起的自噬现象。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测塞来昔布以不同浓度(0~100μmol/L)及作用时间(0~72 h)处理Hep-2细胞后细胞增殖活力的变化;流式细胞仪检测不同浓度及时间塞来昔布处理后Hep-2细胞的凋亡率;透射电镜观察塞来昔布处理后的细胞超微结构改变;Western blotting检测凋亡诱导因子(AIF)移位改变。结果塞来昔布呈时间和浓度依赖性地抑制Hep-2细胞的增殖;诱导喉癌细胞凋亡并呈浓度依赖性;药物处理72 h与48 h相比凋亡率的改变无统计学意义(P0.05),药物处理72 h后在电镜下观察到自噬现象;AIF蛋白逐渐从线粒体释放、移位到细胞核。结论塞来昔布可诱导喉癌细胞凋亡,其机制涉及非caspase依赖的AIF机制,Hep-2细胞产生的自噬可能会对抗塞来昔布诱导的凋亡。
【图文】：

赵永强，等．COX-2选择性抑制剂诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及自噬的体外研究41Hep-2细胞的活力均有不同程度的下降(P均＜0．05)，细胞增殖受抑制且呈浓度依赖性(图1B)。图1塞来昔布处理Hep-2细胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞来昔布处理Hep-2细胞不同时间;B:不同浓度塞来昔布处理Hep-2细胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞来昔布作用后Hep-2细胞的超微结构变化如图2所示，溶剂对照组Hep-2细胞核形态完整，有2个异形性的核仁，染色质聚集于核仁，核膜完整，无自噬空泡或自噬体(图2A);塞来昔布作用48h后，细胞核内完整的核仁结构消失，染色质凝集并散布或边集于细胞核，核膜不规则扩张，出现凋亡改变，但无自噬空泡或自噬体(图2B);塞来昔布作用72h后，可见自噬改变:在胞浆的多个位置出现有膜结构包绕的自噬空泡和自噬体(图2C箭头所示)。图2塞来昔布作用后Hep-2细胞超微结构的变化(透射电镜下)A:溶剂对照组(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞来昔布诱导Hep-2细胞凋亡如图3所示，流式细胞仪检测结果中，凋亡象限图以Q2与Q4之和计算凋亡率。塞来昔布作用24h后，30～100μmol/L塞来昔布诱导细胞凋亡的比例逐渐升高，均高于溶剂对照组(P均＜0．05)，相邻两浓度间的差异均有统计学意义(P均＜0．05)。50μmol/L塞来昔布

南陆?P均＜0．05)，细胞增殖受抑制且呈浓度依赖性(图1B)。图1塞来昔布处理Hep-2细胞后的增殖抑制率A:50μmol/L塞来昔布处理Hep-2细胞不同时间;B:不同浓度塞来昔布处理Hep-2细胞24h。*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L。Fig．1InhibitionrateofHep-2cellsafterthetreatmentofcelecoxibA:Hep-2cellsweretreatedwith50μmol/Lcelecoxibfordifferenthours;B:Hep-2cellsweretreatedwithdifferentdosesofcelecoxibfor24h．*P＜0．05vs0h;△P＜0．05vs0μmol/L．2．2塞来昔布作用后Hep-2细胞的超微结构变化如图2所示，溶剂对照组Hep-2细胞核形态完整，有2个异形性的核仁，染色质聚集于核仁，核膜完整，无自噬空泡或自噬体(图2A);塞来昔布作用48h后，细胞核内完整的核仁结构消失，染色质凝集并散布或边集于细胞核，核膜不规则扩张，出现凋亡改变，但无自噬空泡或自噬体(图2B);塞来昔布作用72h后，可见自噬改变:在胞浆的多个位置出现有膜结构包绕的自噬空泡和自噬体(图2C箭头所示)。图2塞来昔布作用后Hep-2细胞超微结构的变化(透射电镜下)A:溶剂对照组(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)。Fig．2UltrastructurechangesofHep-2cellstreatedwithcelecoxib(underelectronmicroscope)A:Controlgroup(×3000);B:48h(×5000);C:72h(×12000)．2．3塞来昔布诱导Hep-2细胞凋亡如图3所示，流式细胞仪检测结果中，凋亡象限图以Q2与Q4之和计算凋亡率。塞来昔布作用24h后，30～100μmol/L塞来昔布诱导细胞凋亡的比例逐渐升高，均高于溶剂对照组(P均＜0．05)，，相邻两浓度间的差异均有统计学意义(P均＜0．05)。50μmol/L塞来昔布处理细胞不同时间后，凋亡率均高于0h对照组(P均＜0．05);塞来昔布处理12、24、48h，凋亡率随时间延长

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